Approaching the function of a Lipid transfer protein and various miRNAs in the formation of the Arabidopsis root periderm

Abstract

ENG- This thesis aims to explore the two knowledge gaps exposed above. First, we identified a gene that codes for an LTP, which was overexpressed in phellem and other suberized structures of different plant species. To characterize this LTP we analysed Arabidopsis mutants deficient in this gene. The root suberized tissues of these mutants showed a high and specific reduction of alkyl caffeates in suberin-associated waxes indicating that the LTP is required to deposit these compounds in the su-berized root tissues. We also observed a slight but increased permeability of the mutant seeds, in agreement with defects in their outer suberized seed coat. Unexpectedly, these mutant plants showed a variable but sometimes higher resistance to Ralstonia solanacearum, a pathogen that ini-tially colonizes the root. Although unexpected, this interesting result might indicate some metabolic rerouting and needs further assessment. Overall, while further research is needed, these results high-light the relationship between LTP and suberized tissues. Second, we identified the most relevant miRNA by comparing the miRNA expression profile of Quer-cus spp. barks exhibiting different kinds of periderm. Specifically, we classified them in cork-type barks and rhytidome-type barks, the former showing a thick and unique periderm consisting of sev-eral layers, and the latter showing several thin periderms mixed with other tissues. We selected a subset of miRNAs upregulated in cork-type barks and we identified their Arabidopsis orthologues. The promoters of some of these miRNAs were active in Arabidopsis root periderm. To uncover the molecular role of these miRNAs, we generated Arabidopsis plants specifically engineered to se-quester and block the activity of selected miRNAs in tissues involved in periderm formation or in the periderm itself. Some developmental defects were observed, particularly when secondary growth was stimulated by phytohormones. However, the results showed variability, and the effects were relatively modest. In summary, these results provide a set of candidate miRNAs for periderm for-mation and set the basis for the systematic characterization of miRNAs in the Arabidopsis root peri-derm

CAT- En aquesta tesi, s’han explorat aquests dos buits de coneixement. D’una banda, s’ha identificat una LTP induïda en estructures suberitzades de diverses espècies i, per tal de caracteritzar la funció d’aquesta proteïna s’han analitzat plantes d’Arabidopsis que no presenten aquest gen. Els teixits suberitzats de les arrels d’aquestes plantes presentaven un reducció significativa d’alquil cafeats en les ceres associades a la suberina, el que indica que es requereix aquesta LTP per l’acumulació d’aquests compostos en els teixits suberitzats de les arrels. També vam observar un lleuger incre-ment en la permeabilitat de les llavors d’aquest mutants, el que concordaria amb defectes en la suberificació de la coberta de la llavor. Sorprenentment, aquestes plantes mostren una resistència variable, però alguns cops incrementada, a Ralstonia solanacearum, un patogen que inicialment co-lonitza l’arrel. Tot i que inesperat, aquest resultat podria indicar alguna redistribució metabòlica i necessita ser re-avaluada. En conjunt, tot i que cal seguir investigant, aquests resultats posen de relleu la relació de la LTP amb els teixits suberitzats. De l’altra, s’han identificat els miRNAs més rellevants comparant el perfil d’expressió de miRNAs de les escorces de Quercus spp. que mostren diferent tipus de peridermes. Concretament, vam classifi-car les escorces en tipus suro i tipus ritidoma. Les primeres mostrant un periderma gruixut que con-sisteix de diverses capes, i les últimes una successió de peridermes fins barrejats amb altres teixits. Vam seleccionar un subconjunt de miRNAs que es trobaven induïts en escorces tipus suro i vam iden-tificar els seus ortòlegs en Arabidopsis. Els promotors d’alguns d’aquests miRNAs eren actius en el periderma d’arrel d’Arabidopsis. Per avaluar aquests miRNAs a nivell molecular, vam generar plantes d’Arabidopsis modificades específicament per a segrestar i bloquejar l’activitat dels miRNAs selecci-onats en el periderma o en teixits involucrats en la seva formació. Vam detectar alguns defectes en el desenvolupament, particularment quan estimulàvem el creixement secundari amb fitohormones. Tot i així, els resultats mostraven variabilitat i els defectes eren més aviat modestos. En resum, aquests resultats proporcionen un grup de miRNA candidats per la formació del periderma i senten les bases per a la caracterització sistemàtica dels miRNAs en el periderma de l’arrel d’Arabidopsis