Cloning and characterization of a novel inhibitory receptor expressed by myeloid cells

Abstract

El presente trabajo describe el clonaje y caracterización de un nuevo receptor inhibidor de la superfamilia de las Ig, que hemos denominado IREM-1 (Immune Receptor Expressed by Myeloid Cells). El analisis de su secuencia demuestra que esta molécula forma parte de la familia multigénica conocida como CMRF35 o CD300. IREM-1 fue clonado a partir de cDNA proveniente de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs), y es una glucoproteina tipo I de membrana, con un único dominio Ig extracelular, un fragmento transmembrana y una cola citoplasmática con cinco residuos tirosina que cosntituyen diversos motivos de señalización intracelular. Dos de estos residuos, las tirosinas 205 y 249, corresponden a ITIMs, mientras que las tirosinas 236 y 263 son parte de motivos YxxM asociados al reclutamiento de PI3K. La tirosina más distal (Y284) podría ser considerada como parte de un motivo ITIM-like. IREM-1 es capaz de asociarse a la fosfatasa SHP-1, y hemos identificado al residuo Y205 como principal responsable de dicha interacción. IREM-1 es capaz de producir señales inhibitorias sobre receptores activadores como el FcRI, en un modelo heterólogo de rata con la línea basofílica RBL. Esta inhibición está mediada por ambos ITIMs. IREM-1 también es capaz de unir la subunidad p85 de la PI3K a través de sus dos motivos YxxM. Ambos motivo poseen la capacidad de unir esta molécula. El triple mutante de IREM-1 de los 2 sitios ITIMs y el ITIM-like, que no une SHP-1, es capaz de producir señales activadoras como la inducción de la degranulación en RBLs. Esta respuesta es dependiente de PI3K y es anulada con inhibidores de esta enzima. La expresión de IREM-1 se restringe a células hematopoiéticas de linaje mieloide incluyendo precursores de médula ósea CD34+. En conclusión, presentamos la identificación y caracterización molecular y funcional del receptor IREM-1.

The present work describes the cloning and characterization of a novel inhibitory receptor belonging to the Ig superfamily, that we termed IREM-1 (Immune Receptor Expressed by Myeloid Cells). The analysy of IREM-1 sequence demonstrated that this molecule belongs to the multigenic family known as CMRF35 or CD300.. IREM-1 was cloned from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) cDNA, and it is a type I glycoprotein, with a single extracellular Ig domain, a transmembrane region and a cytoplasmic tail with five tyrosine residues in the context of several intracellular signaling motifs. Two of these residues, including tyrosines 205 and 249, correspond to ITIMs, whereas tyrosines 236 and 263 are part of YxxM motifs associated to the recruitment of PI3K. The most distal tyrosine (Y284) could be considered as part of an ITIM-like motif. IREM-1 is able to associate to SHP-1 phosphatase, and we identified the residue Y205, as the main responsible for the interaction. IREM-1 delivers inhibitory signal over activating receptors as Fc&#61541;RI, in a heterologous model as the rat basophilic cell line, RBL. This inhibition is mediated by both ITIMs. IREM-1 also binds the p85 subunit of PI3K through its YxxM motifs. Both motifs have the capacity of binding this molecule.<br/>A mutated form of IREM-1 mutant lacking the two ITIMs and the ITIM-like, is able to produce activating signals like the induction of of RBL degranulation. This responses are produced in the absence of SHP-1 recruitment and are dependent on PI3K, because are abrogated with inhibitors of this enzyme. IREM-1 expression is restricted to hematopoietic cells of myeloid lineage, including CD34+ precursors from bone marrow. <br/>In conclusion, we herein present the identification and molecular and functional characterization of the receptor IREM-1.