Caracterización histológica y expresión inmunohistoquímica de los marcadores p53 y p21 en el trofoblasto placentario en preeclampsia

Abstract

Introducción La preeclampsia es una enfermedad frecuente en el embarazo, que se incluye dentro del grupo denominado trastornos hipertensivos del embarazo y constituye hasta un 10% de las gestaciones de forma global. Se ha encontrado incremento de la apoptosis en placentas de mujeres con preeclampsia en comparación con mujeres con embarazos sin esta enfermedad. Existen escasas referencias en relación a la expresión inmunohistoquímica de la p53 y la p21 en el citotrofoblasto y sincitiotrofoblasto de placentas de mujeres con preeclampsia por lo que el presente estudio contribuye al respecto, complementando con la aportación de la expresión de la apoptosis a nivel óptico evaluada con hematoxilina y eosina. Objetivos Los objetivos de este trabajo son describir los principales hallazgos histopatológicos en placentas con preeclampsia, así como describir la expresión inmunohistoquímica de los marcadores p53 y p21. Material y métodos En esta investigación estudiamos placentas procedentes de mujeres del área de salud I (Murcia/Oeste) que durante el embarazo presentaron preeclampsia. Se utilizó un grupo control de mujeres con gestaciones normales. El estudio se realizó en colaboración con el Área de Fisiología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Murcia y la Unidad de Medicina Materno fetal del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca, del cual uno de los facultativos especialistas obtuvo los datos clínicos y muestras biológicas. El estudio histopatológico y la inmunohistoquímica se realizó en el Servicio de Anatomía Patológica de este Hospital. El trabajo fue de tipo observacional, transversal y prospectivo. La muestra final incluyó 53 placentas, de estás 15 correspondieron a placentas de embarazo normal (grupo control), 22 a placentas con preeclampsia pretérmino y 16 a placentas con preeclampsia a término. El estudio microscópico se realizó con tinción de hematoxilina y eosina obteniéndose varias preparaciones histológicas de cada caso. La evaluación inmunohistoquímica se realizó siguiendo la escala de Fulop con marcadores para p53 y p21. Resultados Las placentas con preeclampsia mostraron signos de arteriolopatía decidual (aterosis aguda, necrosis fibrinoide y placentación deficiente), sin evidencia de cambios de este tipo en las placentas del grupo control con embarazo normal. La arteriolopatía decidual en placentas con preeclampsia fue alta (65,8%), encontrándose además mayor número de infartos (55,3%). Por otro lado se encontraron diferencias notables entre las placentas con preeclampsia del grupo pretérmino y a término, observando mayor número de casos de arteriolopatía decidual, aterosis aguda, necrosis fibrinoide y placentación deficiente en el grupo de placentas con preeclampsia pretérmino que en el de término (72,7%, 54,6%,45,4% y 77,3%). Las placentas con preeclampsia pretérmino mostraron mayor incremento de células de hofbauer, cambios estromales y grado severo de presencia de nodos sincitiales ( >50%) siendo estadísticamente significativo. Además se encontró que las placentas con preeclampsia a término mostraron más calcificaciones que el grupo de preeclampsia pretérmino, con diferencias estadísticamente significativas (93,8%). En relación a los estudios de inmunohistoquímica realizados, se encontró que tanto la intensidad, como el grado de expresión de la p53 y p21 en el citotrofoblasto, fue mayor en las placentas con preeclampsia que en el grupo control. La inmunohistoquímica de la p53 en el sincitiotrofoblasto no mostró diferencias, que si fueron detectadas en la tinción de p21 en el sincitiotrofoblasto tanto en intensidad como en el grado de expresión. En cuanto a los dos grupos de placentas de preeclampsia, no se encontraron diferencias significativas en intensidad y grado de expresión de p53. La intensidad de la p21 tanto en el citotrofoblasto como en el sincitiotrofoblasto fue mayor en placentas con preeclampsia pretérmino con tinción marcada en 77,3% y 50% respectivamente mostrando además mayor grado de expresión para este marcador. Conclusiones El grupo de placentas con preeclampsia mostró significativamente una mayor frecuencia de aterosis aguda, necrosis fibrinoide, infartos y placentación deficiente, contrastando con el grupo de placentas sin enfermedad, en las que no se detectaron estos cambios. Las placentas con preeclampsia mostraron diferencias histopatológicas respecto a placentas no patológicas, identificándose una mayor frecuencia de arteriolopatía decidual, lo que evidencia una mayor susceptibilidad al daño vascular estructural. La intensidad y el grado de expresión inmunohistoquímica de la p53 en el citotrofoblasto fue significativamente superior en las placentas con preeclampsia que en el grupo control. La tinción inmunohistoquímica de p21 fue mayor en el citotrofoblasto en las placentas con preeclampsia, tanto en la intensidad como en el grado de expresión, que en el grupo control. También en el sincitiotrofoblasto el grado de expresión fue significativamente superior en el grupo de preeclampsia, que en el grupo sin patología. Las placentas con preeclampsia pretérmino mostraron significativamente una mayor expresión inmunohistoquímica de la p21 en el citotrofoblasto, que en los casos de preeclampsia a término. Observamos una asociación significativa entre la presencia de altas resistencias uterinas y un mayor grado de expresión inmunohistoquímica de la p21 en el citotrofoblasto, hallazgo que podría constituir una interesante línea de investigación futura.

SUMMARY Introduction Preeclampsia is a common disease during pregnancy, and is included within the group of diseases known as hypertensive pregnancy disorders and accounts for 10% of overall gestations. Increased apoptosis has been found in the placentas of women with pre-eclampsia unlike women with pregnancies without this disease. There have been few references to p53 and p21 immunohistochemical expression in the cytotrofoblast and syncytiotrofoblast of the placentas of women with pre-eclampsia so that the present study intends to contribute to this area of research, complemented by an analysis of apoptosis at an optical level assessed using hematoxylin and eosin. Objectives The objectives of this study are to describe the main histopathological findings in placental samples of patients with preeclampsia, and to report on the detection of p53 and p21 proteins by immunohistochemistry. Material and methods In our present research we have studied placentas from women in our Healthcare Area I (Murcia/West) who presented with preeclampsia during pregnancy. A group of women with normal gestation was used as the control. The study was carried out in collaboration with the Physiology Department of the Faculty of Medicine at the University of Murcia and the Maternal-Fetal Medicine Unit at the Virgen de la Arrixaca Clinical Hospital, where one of the specialist physicians obtained the clinical data and biological samples. The histopathological study and immunohistochemistry were carried out in the Pathological Anatomy Service at the same hospital. It was a prospective, observational and cross-sectional study. The final sample included 53 placentas, of which 15 were placentas from normal pregnancies (control group), 22 placentas with preeclampsia from preterm pregnancies and 16 placentas with preeclampsia from term pregnancies. The microscopic analysis was carried out using hematoxylin and eosin staining obtaining several histological preparations from each case. The immunohistopathological assessment was carried out following Fulop’s scale with markers for p53 and p21. Results The placentas with preeclampsia showed signs of decidual arteriolopathy (acute atherosis, fibrinoid necrosis and deficient placentation), while there was no evidence of these types of changes in the placentas of the control group (with a normal pregnancy). In placentas with preeclampsia, decidual arteriolopathy was high (65.8%), and there were also a high number of heart attacks (55.3%). In addition there were notable differences between the placentas with preeclampsia in the preterm and the term pregnancy group, with more cases of decidual arteriolopathy, acute atherosis, fibrinoid necrosis and deficient placentation being observed in the group of placentas with preeclampsia in the preterm pregnancy group than in the term group (72.7%, 54.6%,45.4% and 77.3%). The placentas with preeclampsia in the preterm group had a greater increase in Hofbauer cells, stromal changes and a severe level of syncytial nodes present ( >50%), all being statistically significant. Additionally, it was found that the placentas with preeclampsia in term pregnancies had more calcifications than in the preterm pregnancy group with a statistically significant difference (93.8%). With regard to the immunohistochemical analysis carried out, it was found that both the intensity of p53 and p21 in the cytotrophoblast and the grade of expression of these markers, was greater in the placentas with preeclampsia than in the control group. Immunochemical evidence of p53 protein in the syncytiotrophoblast did not show any differences between the groups, detected using p21 staining in the syncytiotrophoblast to analyze the intensity and grade of expression. With regard to the two groups of placentas with preeclampsia, no significant differences were found in p53 protein intensity and expression. The intensity of p21 expression in both cyto- and syncytiotrophoblast was greater in the placentas with preeclampsia of preterm pregnancies using marker staining in 77.3% and 50% respectively, also revealing a higher level of expression for this marker. Conclusions The group of placentas with preeclampsia showed a significantly higher frequency of acute atherosis, fibrinoid necrosis, heart attacks and deficient placentation, contrasting with the group of placentas with no disease, in which no changes were detected. The placentas with pre-eclampsia showed histopathological differences compared to non-diseased placentas, with a higher frequency of decidual atheriolopathy being identified, a finding which reveals greater susceptibility to structural vascular damage. The intensity and grade of p53 immunohistochemical expression in cytotrophoblast was significantly higher in the placentas with preeclampsia than in the control group. Immunohistochemical staining with p21 had a greater intensity and grade of expression in the cytotrophoblast in the placentas with preeclampsia, than in the control group. It was also found that in the syncytiotrophoblast the grade of expression was significantly greater in the preeclampsia group, than in the group without any disease. The placentas with preeclampsia from preterm pregnancies had a significantly higher immunohistochemical expression of p21 in the cytotrophoblast, than in cases of pre-eclampsia in term pregnancies. We have found a significant association between the presence of high uterine artery resistance and a higher immunohistochemical expression of p21 protein in the cytotrophoblast, a finding that could provide an interesting line of research in the future.