2024-03-28T07:54:43Zhttps://www.tdx.cat/oai/requestoai:www.tdx.cat:10803/38492017-08-31T19:45:32Zcom_10803_120col_10803_130
nam a 5i 4500
Factors de transcripció
Ribonucleotidil Reductasa
Evolució proteica
Ribonucleotidil reductases bacterianes: estudi enzimàtic, genètic i evolutiu
[Barcelona] :
Universitat Autònoma de Barcelona,
2011
Accés lliure
http://hdl.handle.net/10803/3849
cr |||||||||||
AAMMDDs2011 sp ||||fsm||||0|| 0 cat|c
846998022X
Torrents Serra, Eduard,
autor
Tesi
Doctorat
Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia
2001
Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia
Tesis i dissertacions electròniques
Jordan Vallès, Albert,
supervisor acadèmic
Gibert, Isidre,
supervisor acadèmic
TDX
Les Ribonucleotidil Reductases (RNR) són metal·loenzims que catalitzen la reducció dels ribonucleòtids (NTP) als seus corresponents desoxiribonucleòtids (dNTP), que són els monòmers principals per a la síntesi del DNA. S'han descrit tres classes de RNR (I, II i III) atenent la seva estructura, metall, radical i cofactors necessaris per a la síntesi del DNA.<br/>En aquest treball s'ha dut a terme l'estudi de diverses RNR bacterianes pertanyent a les tres classes d'RNR des del punt de vista enzimàtic, genètic i evolutiu.<br/>Les RNR de classe III (NrdDG) tant sols són actives en condicions d'anaerobiosis estricta, estudiant-se en Escherichia coli i Lactococcus lactis. En ambdós casos mutants pels gens nrdD i nrdG, resulten ser imprescindibles en condicions d'anaerobiosi estricta. La sobreexpressió i purificació de les proteïnes NrdDG de Ll ha posat de manifest que la reducció dels NTPs es du a terme en dos etapes, una primera produint-se l'activació de NrdD i una segona on es produeix la reducció del ribonucleòtid. Per primera vegada s'ha observat que la unió de l'ATP segueix una cinètica sigmoidal amb un alt grau de cooperativitat entre els dos llocs involucrats en la regulació al·lostèrica de l'enzim.<br/>Les RNR de classe II (NrdJ) s'han purificat i seqüenciat els seus gens en bacteris filogenèticament primitius com Thermotoga maritima i Deinococcus radiodurans presentant aquestes proteïnes, tots els aa relacionats en la regulació al·lostèrica i activitat catalítica. Podem hipotitzar que ha d'existir una gran relació estructural entre les proteïnes d'aquesta classe amb les de classe I. El gen nrdJ de Dr presenta una inteïna en l'extrem 5' que es processada durant la traducció del gen i absent en la proteïna madura.<br/>En els anys 80 es va caracteritzar parcialment la RNR de Corynebacterium ammoniagenes assignant-la a una nova classe (IV), ja que depenia la seva activitat de manganès. En aquest treball hem purificat i seqüenciat la RNR activa, classificant aquesta RNR la ja descrita classe Ib (nrdHIEF). L'anàlisi transcripcional d'aquesta regió demostra l'existència de dos promotors independents pels trànscrits nrdHIE i pel nrdF. Mitjançant RT-PCR semiquantitativa es va detectar la presència de 10 vegades més trànscrit nrdF que de nrdHIE. Aquests gens veuen incrementada la seva expressió en presència d'hidroxiurea, peròxid d'hidrogen y de manganès en el medi, involucrant d'aquesta manera un possible paper de reguladors transcripcionals que regulen el cicle cel·lular, FUR/DtxR y per reguladors que responen a l'estrès oxidatiu.<br/>Per primera vegada s'ha observat l'existència de les tres classes de RNR (I, II i III) en un mateix organisme com passa en Pseudomonas aeruginosa, detectant-se l'expressió simultània de les RNR de classe I i II.<br/>L'estudi filogenètic i evolutiu a partir d'un alineament de totes les seqüències proteiques disponibles en la base de dades revela que la RNR més ancestral és la classe III que per divergència evolutiva hauria donat lloc a la classe II i posteriorment a la classe I.
a
ES-BaCBU
cat
rda
ES-BaCBU
text
txt
rdacontent
informàtic
c
rdamedia
recurs en línia
cr
rdacarrier