L'apoptosi pot ser induïda a través de nombrosos estímuls, entre els quals hi ha els
receptors de mort. Per induir apoptosi TNFα necessita la participació d'inhibidors de la
transcripció d'ARN o de la síntesi proteica, com són ActD i CHX. En aquest estudi
demostrem com la citotoxicitat de TNFα en cèl·lules PC12 i en neurones corticals
sensibilitzades amb ActD es dóna a través de l'activació de la caspasa iniciadora 8, de
la generació de tBid i de la conseqüent activació de les pro-caspases-9 i -3. A més, el
tractament amb TNFα/ActD no indueix diferències detectables en l'expressió de
proteïnes involucrades en el complex de senyalització de TNFα. L'anàlisi de les
principals proteïnes antiapoptòtiques, com són FLIP, IAPs i els membres de la família
de Bcl-2, demostra que Bcl-xL endogen és capaç de regular l'apoptosi induïda per
TNFα, sense afectar l'activació de la via del factor de transcripció NF-κB. La
sobreexpressió de Bcl-xL dóna resistència a la mort promoguda per TNFα i ActD, i la
reducció dels seus nivells indueix mort cel·lular per mitjà de TNFα, a través de
l'activació de JNK. Per confirmar la rellevància de Bcl-xL en el senyal promogut per
TNFα, es va avaluar l'efecte de la reducció dels nivells basals de proteïnes
antiapoptòtiques com Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w i Mcl-1, en el model cel·lular HeLa, on
aquestes s'hi troben expressades de forma fisiològica, contràriament al que passa en
les cèl·lules PC12, demostrant que Bcl-xL és la proteïna antiapoptòtica més rellevant
en la protecció de la mort induïda per TNFα.
Per altra banda, l'apoptosi induïda per TNFα pot ser deguda a l'acumulació d'elevats
nivells de hemo lliure. El grup hemo sensibilitza les cèl·lules Hepa a l'acció citotòxica
de TNFα a través de la inducció d'estrès oxidatiu, que provoca un dany cel·lular que
porta a l'activació de la via de JNK y de pro-caspasa-3. La producció de ROS i el dany
induït per estrès oxidatiu, així com la mort induïda per TNFα, conjuntament amb
elevats nivells del grup hemo lliure, poden inhibir-se amb l'expressió de proteïnes
protectores com HO-1 y H-Ferritina.

La apoptosis puede ser inducida a través de numerosos estímulos, entre los cuales los
receptores de muerte. Para promover la apoptosis, TNFα necesita la colaboración de
inhibidores de la trascripción del RNA o de la síntesis proteica, como ActD y CHX. En
este estudio demostramos como la citotoxicidad de TNFα en células PC12 y en
neuronas corticales sensibilizadas con ActD ocurre a través de la activación de la
caspasa iniciadora 8, la generación de tBid y la activación de las pro-caspasas-9 y -3.
Además no se detectan diferencias de expresión, inducidas por TNFα/ActD, de
proteínas involucradas en la formación del complejo de señalización de TNFα. El
análisis de las principales proteínas antiapoptóticas, como FLIP, IAPs y miembros de
la familia de Bcl-2, demuestra que Bcl-xL es la molécula endógena capaz de regular la
apoptosis promovida por TNFα, sin afectar la activación de la vía del factor de
trascripción NF-κB. La sobre-expresión de Bcl-xL confiere resistencia a la muerte
apoptótica mediada por TNFα y ActD, y su disminución forzada es capaz de inducir
muerte celular únicamente tratando con TNFα por activación de JNK. Para confirmar la
relevancia de Bcl-xL en la señal promovida por TNFα, la represión de proteínas antiapoptóticas
como Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w y Mcl-1 ha sido evaluada en el modelo de células
HeLa, donde estas se expresan fisiológicamente al contrario que en las células PC12,
demostrando que Bcl-xL es la proteína anti-apoptótica más importante en la protección
de la muerte inducida por TNFα.
Por otra parte, la apoptosis mediada por TNFα puede ser promovida por la
acumulación de elevados niveles del grupo hemo libre. El grupo hemo sensibiliza las
células Hepa a la acción citotóxica de la citoquina TNFα a través de la inducción de
estrés oxidativo, cuyo daño resulta en la activación de la vía de JNK y de pro-caspasa-
3. La producción de ROS y el daño inducido por estrés oxidativo, así como la muerte
inducida por elevados niveles del grupo hemo libre y de TNFα, pueden inhibirse por la
sobre-expresión de proteínas protectoras como HO-1 y H-Ferritina.

Apoptotic cell death is triggered by several different stimuli, among which death
receptors. To induce apoptosis, TNFα needs the cooperation of RNA transcription or
protein synthesis inhibitor, i.e. ActD and CHX. In this study we demonstrate that ActD
renders rat PC12 cells and primary mouse cortical neurons susceptible to the cytotoxic
effect of TNFα by the activation of the initiator caspase 8, generation of tBid and
activation of pro-caspase-9 and -3. Proteins involved in TNFα receptor signaling
complex are not affected by TNFα/ActD stimulation. However, the analysis of antiapoptotic
proteins, e.g. FLIP, IAPs and Bcl-2 family members, demonstrates that Bcl-xL
is the endogenous regulator of neuronal sensitivity to TNFα-induced apoptosis and that
it operates in a NF-κB-independent manner. Bcl-xL overexpression completely protects
against TNFα/ActD-induced apoptosis, whereas its endogenous decrease sensitizes to
TNFα cytotoxic effect promoting JNK-dependent cell death. To point out the relevance
of Bcl-xL in TNFα signaling pathway, endogenous decrease of the main anti-apoptotic
Bcl-2 family members, e.g. Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w and Mcl-1, was performed in HeLa cell
line in which, contrarily to PC12, these proteins are expressed. The results obtained
demonstrate that Bcl-xL is the most important Bcl-2-cytoprotective protein in regulating
TNFα cytotoxicity.
Moreover, TNFα-induced cell death is promoted by high levels of free heme
accumulation. Heme sensitizes Hepa cell line to TNFα-triggered apoptosis enhancing
ROS production and ROS-mediated damage. This results in JNK and pro-caspase-3
activation. Oxidative stress-promoted apoptosis induced by heme/TNFα treatment is
inhibited by the overexpression of HO-1 and H-Ferritin cytoprotective proteins.