Sensibilidad y especificidad de la técnica de detección de DNA de citomegalovirus en la sangre seca de la prueba de detección precoz neonatal (prueba del talón) mediante PCR en los pacientes afectos de citomegalovirus congénito

Author

Vives Oñós, Isabel

Director

Soler Palacín, Pere

Date of defense

2017-09-21

ISBN

9788449074813

Pages

138 p.



Department/Institute

Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Pediatria, d'Obstetrícia i Ginecologia i de Medicina Preventiva

Abstract

La infección congénita por citomegalovirus (CMVc) está considerada la infección congénita más frecuente de los países desarrollados, estimándose su prevalencia en un 0,7% (entre 0,3 y 1,3%). Actualmente, ningún país del mundo realiza cribado universal de CMVc. Para su diagnóstico se debe confirmar la presencia del virus en cualquier fluido corporal (el más frecuentemente usado es la orina) en las dos o tres primeras semanas de vida, pues pasado ese periodo la adquisición puede ser postnatal. Para diferenciar retrospectivamente entre la adquisición pre y postnatal se determina la presencia de DNA del virus mediante PCR en la sangre seca de la prueba de cribado metabólico neonatal. Existen múltiples estudios publicados sobre la sensibilidad de estas técnicas, sólo uno en nuestro país, con sensibilidades entre el 28 y el 100%. El estudio piloto realizado por nuestro grupo en 2014 sobre 14 pacientes mostró una sensibilidad menor (50%) a la descrita en la mayoría de estudios. En este trabajo multicéntrico se ha estudiado la sensibilidad y especificidad de una técnica comercial de rt-PCR (rt-PCR (RealStar CMV®, Altona, Hamburg, Germany)) entre los pacientes del Registro Estatal De Infección Congénita por CMV (REDICCMV), así como los factores relacionados con el resultado. En este trabajo se incluyeron 184 individuos (103 pacientes y 81 controles). Cincuenta y ocho pacientes y dos controles presentaron resultado positivo en la PCR a CMV en sangre seca, lo que equivale a una sensibilidad de la prueba del 56% (95%CI 47-65%), especificidad del 98% (91-99%), razón de probabilidad positiva del 22,81 (5,74-90,58) y razón de probabilidad negativa del 0,45 (0,36-0,60). Al analizar las variables clínicas en relación al resultado de la PCR se observa que únicamente la carga viral al nacimiento tiene relación con la misma: cargas virales más bajas al nacimiento tienen con más frecuencia rt-PCRs negativas en la sangre seca. Sin embargo, al estudiar la correlación entre la carga viral en sangre al nacimiento y en sangre seca (técnica semicuantitativa), no se ha observado ninguna correlación (se ha podido estudiar en 51 pacientes). Como conclusión podemos decir que, con la técnica diagnóstica y metodología utilizadas, ante un resultado negativo de la rt-PCR en la muestra de sangre seca de la prueba de cribado metabólico no podemos descartar infección congénita por CMV, sobre todo en los niños con cargas virales más bajas al nacimiento. Por el contrario, un resultado positivo tiene una elevada especificidad para el diagnóstico de confirmación de CMVc. Es necesario disponer de una técnica definida en cuanto a muestra, extracción, procesamiento e interpretación que permita el diagnóstico retrospectivo de la infección por CMVc cuando ello sea necesario.


Congenital cytomegalovirus (cCMV) is known to be the most common cause of congenital viral infection of the developed countries, its prevalence among 0,7% (between 0,3 and 1,3%). Currently, there is no country worldwide with a universal screening program. The diagnosis of a congenital infection requires the confirmation of the virus in any body fluid (urine is the most commonly used) within the first two or three weeks of life. Afterwards, the detection of CMV can be due to postnatal infection. If we need to make a retrospective diagnosis of congenital or postnatal infection when we suspect the infection after the first two or three weeks of life, the DNA presence of the virus is checked by a PCR technique in dried blood spots (DBS) from the metabolic screening program. There have been many published studies about this topic, only one in Spain, with sensitivities ranging from 28% until 100%. The pilot study made by our group with 14 patients showed a lower sensitivity (50%), compared with those reported in most of the previously published studies. In this multicentric study the sensitivity and specificitiy of a commercial rt-PCR (rt-PCR (RealStar CMV®, Altona, Hamburg, Germany)) has been assessed in the Spanish Registry of Congenital CMV Infection (Registro Estatal De Infección Congénita por CMV (REDICCMV)), as well as the relation between the result and clinical variables. REDICCMV is an online registry including all those cCMV patients from hospitals around the country included in the project. One hundred and eighty-four subjects were included (103 patients and 81 controls). Fifty-eight samples from the patient group in contrast to two among the control samples tested positive by CMV DNA rt-PCR, leading to a sensitivity of 56% (95%CI 47-65%), specificity 98% (91-99%), positive likelihood ratio 22.81 (5.74-90.58) and negative likelihood ratio 0.45 (0.36-0.60). The only variable significantly associated with negative CMV DNA results on DBS testing was the plasma viral load at birth (bPVL): those patients with lower bPVL tested negative more frequently than those with higher bPVL. However, no correlation between bPVL and viral load in DBS (semi quantitative technique) was found in those patients that could be checked for both viral loads (51). In conclusion, with our technique and used methodology, a negative rt-PCR DBS result does not rule out congenital CMV infection, especially in patients with low viremia at birth. In contrast, a positive result has a high specificity for the retrospective diagnosis of cCMV infection. There is a need of an available technique regarding sampling, extraction, processing and result interpretation for the retrospective diagnosis of cCMV when necessary.

Keywords

Citomegalovirus congènic; Citomegalovirus congénito; Congenital cytomegalovirus infection; Diagnòstic; Diagnóstico; Diagnosis; Reacció en cadena de la polimerasa; Reacción en cadena de la polimeras; Polymerase chain reaction

Subjects

61 - Medical sciences

Knowledge Area

Ciències de la Salut

Documents

ivo1de1.pdf

1.078Mb

 

Rights

L'accés als continguts d'aquesta tesi queda condicionat a l'acceptació de les condicions d'ús establertes per la següent llicència Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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