Evaluación del daño hepático y respuesta inmunitaria local en cabras vacunadas con Catepsina L1 e infectadas con Fasciola Hepática

Abstract

El objetivo del presente estudio ha sido estudiar la eficacia protectora, así comolas lesiones hepáticas y la respuesta inmunitaria inmunitaria local en cabras inmunizadascon catepsina L1 recombinante (CL1) de F. hepática con dos adyuvantes (Montanide Isa70 VG y Quil A), con el segundo adyuvante se estudiaron las lesiones y respuestainmunitaria en fases tempranas y tardías de la enfermedad.Para alcanzar los objetivos propuestos se realizaron dos experiencias, en laExperiencia 1 se utilizaron 21 cabras, hembras, de raza Florida Sevillana de 4 meses deedad que fueron divididas en tres grupos: los grupos 1 y 2 correspondieron al grupoadyuvante (n=8) (Montanide) y grupo inmunizado con CL1 en Montanide (n=8),respectivamente; el grupo 3 (n=5) correspondió al grupo control negativo (no infectado yno inmunizado). Sobre los grupos 1 y 2 se realizaron tres inmunizaciones separadasentre ellas por un periodo de 3 semanas. Posteriormente, en la 10ª semana desde laprimera inmunización, los animales fueron infectados con 200 metacercarias viables de F.hepatica procedentes de la Universidad de Bristol (Reino Unido), y finalmentesacrificados 15 semanas después de la infección (15 spi) para estudiar el número deparásitos, eliminación de huevos, lesiones hepáticas y respuesta inmunitaria en fasestardías.En la Experiencia 2 se utilizaron 27 cabras, machos, de raza Malagueña de 4meses de edad que fueron dividas también en 3 grupos: los grupos 4 y 5 correspondieronal grupo adyuvante (n=10) (Quil A) y grupo inmunizado con CL1 utilizando Quil A comoadyuvante (n=10) respectivamente; el grupo 6 (n=7) correspondió al grupo controlnegativo (no infectado y no inmunizado). En los grupos 4 y 5 se realizaron dosinmunizaciones separadas por 4 semanas y posteriormente se infectaron en la semana10 con una dosis de 100 metacercarias de F. hepatica de origen ovino (RidgewayResearch Ltd., UK). Además, en este ensayo tres animales de cada grupo fueronsacrificados por inyección intravenosa de tiobarbital a los 7, 8 y 9 días después de lainfección (dpi) para estudiar los cambios durante las primeras etapas de la misma. Lascabras restantes (7 animales en los grupos 4 y 5; 4 animales en el grupo 6) fueroneutanasiadas 15 semanas después de la infección (15 spi). Las dos experiencias fueronaprobadas por el Comité de bioética de la Universidad de Córdoba para experimentaciónanimal, referencia N. 7119.El estudio parasitológico no mostró diferencias significativas entre los gruposvacunados y controles adyuvantes en ambas experiencias, tanto en el número deparásitos recuperados como en la tasa de implantación. El análisis estadístico llevado acabo respecto a la longitud y anchura de los parásitos adultos tampoco mostródiferencias significativas entre los grupos de ambas experiencias, exceptuando el anchoobservado en los animales pertenecientes a la experiencia 1 donde esta medida si fuesignificativamente menor en el grupo vacunado. Respecto a la ganancia de peso no hubodiferencias entre grupo vacunado y control adyuvante en la experiencia 1, mientras queen la experiencia 2 sí hubo una ganancia de peso significativamente mayor en el grupovacunado respecto al control de adyuvante.El estudio anatomopatológico macroscópico en las fases tardías de ambasexperiencias mostró lesiones típicas de la infección por F. hepatica y coinciden de formagenérica con las observadas por otros autores en ovinos y caprinos. Si bien los animalesde ambas experiencias mostraron lesiones similares, éstas fueron más severas en losanimales de la experiencia 1 respecto a los de la experiencia 2 como cabría esperardebido a la mayor dosis de infección y mayor número de parásitos recuperados.Respecto a los nódulos linfáticos hepáticos en ambas experiencias se observó unaumento significativo en el tamaño y el peso de los grupos infectados respecto al controlno infectado...

The aim of this study was to investigate the protective efficacy as well as liverdamage and local immune response in goats immunized with recombinant cathepsin L1(CL1) of Fasciola hepatica with two adjuvants (Montanide ISA 70 VG and Quil A). Hepaticdamage and local immune response in early and late stages of the infection were studiedin the second adjuvant trial.To achieve these objectives two experiments were conducted, in the first one 21females, Florida Sevillana, 4-months of age goats were divided into three groups: groups1 and 2 correspond to the adjuvant group (n = 8 ) (Montanide) and CL1 in Montanide (n =8), respectively; Group 3 (n = 5) corresponded to the negative control group (not infectedand not immunized). On groups 1 and 2 three immunizations were administeredsubcutaneously 3 weeks apart. Subsequently, at week 10 from the first immunization, theanimals were infected with 200 F. hepatica metacercariae (University of Bristol,UK), andfinally animals were sacrificed 15 weeks post infection (15 wpi) to study the number ofparasites, egg output, liver damage and local immune response.In second trial 27 male, Malagueña, 4-months of age goats were also divided into3 groups: Groups 4 and 5 corresponded to the adjuvant group (n = 10) (Quil A) andimmunized group CL1 (n=10), respectively; Group 6 (n = 7) corresponded to the negativecontrol group (not infected and not immunized). In groups 4 and 5 two subcutaneousimmunizations were administered 4 weeks apart, and 10 weeks after first immunizationanimals were orally infected with a dose of 100 F. hepatica metacercariae of ovine origin(Ridgeway Research Ltd., UK). Moreover, in this trial three animals from each group weresacrificed by intravenous injection of thiobarbital at 7, 8 and 9 days after infection (dpi) tostudy liver damage and local immune response in the early stages of infection. Theremaining goats (7 animals in groups 4 and 5; 4 animals in Group 6) were euthanized 15weeks after infection (15 wpi). The two experiments were approved by the BioethicsCommittee of the University of Cordoba to animal experiments, reference N. 7119.Parasitological study showed no significant difference between vaccinated groupsand adjuvants groups in the two experiences, for both the number of parasites recoveredas the implantation rate. The statistical analysis carried out with respect to the length andwidth of the adult parasites also showed no significant differences between vaccinatedand adjuvant controls, except the fluke width which was lower in the vaccinated grouprespect to the adjuvant group. Animal weight gain did not differ between adjuvant andvaccinated group in vaccine trial 1, while significantly greater in the vaccinated groupcompared to the adjuvant control group the second vaccine trialThe macroscopic pathologic examination at 15 wpi in both experiences showedlesions typical of chronic fasciolosis such as whitish tortuous scars over the liver surface,mainly involving the left lobe, enlarged bile ducts and gallbladder. The severity of grosshepatic lesions was higher in animals from the first vaccine trial which was correleatedwith the higher dose administered and higher number of parasite recovered. In the twovaccine trial the severity of gross hepatic lesions was similar in vaccinated and theiradjuvant control groups. Regarding the hepatic lymph nodes in both experiences asignificant increase in the size and weight of the infected compared to uninfected controlgroups, were noted.Liver microscopic lesions observed at 15 wpi of both experiences were similar tothose described by other authors in chronic infections of F. hepatica. Comparisonbetween vaccinated and adjuvant control groups showed no significant differences,except for the increased number of eosinophils and globular leukocytes in the first trialCL1 vaccinated group, while the Montanide group showed higher number of granulomas...