Bases anatómicas y técnicas trazadoras fluorescentes en el estudio de la reinervación sensitiva perifèrica

Autor/a

Puigdellívol Sánchez, Anna

Director/a

Prats Galino, Alberto

Fecha de defensa

2001-12-17

Depósito Legal

B 20276-2014

Páginas

69 p.



Departamento/Instituto

Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Morfològiques i Odontoestomatologia

Resumen

El objetivo de la tesis era encontrar una forma de calcular la selectividad para reinervar las mismas dianas proximales o distales por parte de la población neuronal original tras una lesión nerviosa periférica. Por un lado, se podría detectar la alteración del patrón de distribución de las neuronas que inervan las zonas de estudio después de la regeneración. Otro método podría contemplar el doble marcaje con trazadores fluorescentes que permitiesen marcar la población neuronal original con un trazador y la población regenerante con otro, para buscar coincidencias. El estudio de las neuronas sensitivas de los principales nervios de la extremidad posterior (femoral y ciático) demostró una organización somatotópica de las células, en particular en el ganglio L4, donde ambos nervios coinciden. Allí, el nervio femoral se distribuye dorsal y rostralmente, mientras que el ciático ocupa el resto del ganglio. Sin embargo, las neuronas que inervaban las áreas más distales, las falanges distales de los dedos de los pies, se hallaban distribuidas difusamente en los ganglios L3-L6, si bien presentaban también una organización rostrocaudal, de forma que en los ganglios más rostrales se hallaban más representados los dedos mediales y caudalmente los más laterales. La resección del nervio ciático combinada con la inyección posterior de trazador en los dedos permitió detectar la permanencia de marcaje neuronal en los ganglios lumbares L3 y L4, que se eliminaba al añadir la resección del nervio femoral. Sin embargo, permanecía marcaje en L5 y L6 que no desapareció hasta la resección del aquí descrito nervio musculocutáneo. Por tanto, estos tres nervios participaban en la inervación de los dedos de los pies. En animales control, Fast blue (FB), diamidino yellow (DY) y fluoro-gold (FG) marcaban un número similar de neuronas al inyectarlos subcutáneamente, alcanzando cifras del 75-85% de doble marcaje. Al aplicar una cápsula de DY, seguida de otra con FB en el extremo seccionado del nervio ciático, se alcanzaba un 97% de doble marcaje. La inyección de DY seguida inmediatamente o meses más tarde de una cápsula de FB también conseguía la práctica totalidad de doble marcaje de las células, mientras que el porcentaje se reducía al 10% en caso de aplicar primero el FB. Al aplicarlos en nervios regenerantes el FB actuaba con igual eficacia tanto si se aplicaba en nervios inicialmente marcados con DY o sin marcaje previo. Asimismo, otros experimentos demostraron que una pequeña proporción del trazador que se aplica en una zona al principio del estudio puede ser captado de nuevo meses más tarde por axones regenerantes, ya sean pertenecientes a la población original o bien desviados a la zona de estudio. Si los axones desviados captan también el segundo trazador, sus somas estarán doble marcados, al igual que la población original, confundiendo su identificación. El estudio de la sección y reparación del nervio ciático demostró una gran selectividad por parte de las neuronas originales en la reinervación del nervio tibialis (en un 80-90%), en la primera bifurcación del nervio ciático, pero significativamente inferior en los dedos de los pies (del orden del 22-56%), con una limitada colateralización del 1-2% por parte de los nervios femoral y musculocutáneo.


Our aim was to quantify the selective reinnervation of proximal and distal targets by their original neuronal population after a peripheral nerve injury, by detecting alterations in the neuronal arrangement after the regeneration or by labelling the original population with one tracer and the regenerating population with another to detect double labelled cells. When labelling the femoral and the sciatic nerves, a somatotopical arrangement was found in L4 dorsal root ganglion (DRG) where the femoral is distributed dorsally, rostrally and laterally while the sciatic occupies the rest of the ganglion. However, neurones innervating the toes showed a diffuse rostrocaudal organization in L3-L6 DRG: rostral ganglia showed more neurones from medial toes and caudal ganglia from lateral toes. After the ressection of the sciatic nerve, combined with tracer injections in the toes, labelling was seen in all DRG L3-L6. L3 and L4 labelling disappeared after adding the ressection of the femoral nerve while labelling in L5-L6 disappeared after adding also the ressection of the so called musculocutaneous nerve, suggesting the participation of all those nerves in the toe innervation. In control animals, fast blue (FB), diamidino yellow (DY) and fluoro-gold (FG) labelled a similar number of neurones after subcutaneous injections, reaching double labelling rates of 75-85%. With successive application of capsules with DY and FB in sciatic nerve, a 97% of double labelling was obtained. The tibialis nerve injection of DY followed by a capsule application of FB lead also to more than 90% of double labelling. When applying tracers to regenerating nerves, FB labelled the same number of cells when applied alone or in a previous DY labelled nerve. Other experiments demonstrated that part of the tracer that is injected subcutaneously or in nerve branches remains available to be uptaken by new regenerating axons (misdirected or not), confusing the iddentification of the original population. After sciatic nerve injury, there was a high selective reinnervation of the tibialis nerve (80-89%), at the main bifurcation of the sciatic nerve, but a reduced selectivity in distal areas (22-56% in the toes), with a limited collateralization (1-2%) of adjacent femoral and musculocutaneous nerves.

Palabras clave

Nervis perifèrics; Nervios periféricos; Peripheral nerves; Anatomia humana; Anatomía humana; Human anatomy

Materias

616.8 - Neurología. Neuropatología. Sistema nervioso

Área de conocimiento

Ciències de la Salut

Nota

Programa de doctorat: Organogénesis y anatomía clínica y aplicada. Departament de Ciències Morfològiques i Odontoestomatología, 1995-1997

Documentos

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Derechos

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