TDX/TDR - Departament de Fisiologia

Influencia de la diabetes experimental sobre la reactividad de las arterias carótida y renal de conejo a la testosterona

Tue, 22 May 2012 12:01:15 GMT

Influencia de la diabetes experimental sobre la reactividad de las arterias carótida y renal de conejo a la testosterona Pérez Muñoz, Antonio Miguel En este trabajo hemos estudiado las modificaciones producidas por la diabetes inducida por el aloxano en los mecanismos que regulan la respuesta de las arterias carótida y renal de conejo a la testosterona. La concentración plasmática de testosterona libre y total de los conejos diabéticos fue significativamente menor que la de los conejos control. ARTERIA CARÓTIDA. En la arteria carótida, la testosterona produjo una relajación de magnitud dependiente de la concentración, que fue mayor en conejos diabéticos que en conejos control. En conejos control, ni la eliminación del endotelio ni la incubación con el inhibidor del enzima óxido nítrico sintasa (NOS), NG-nitro-L-arginina, modificó la relajación arterial a la testosterona, pero el inhibidor de la ciclooxigenasa (COX), indometacina, aumentó dicha relajación. En contraste, en arteria carótida de animal diabético la eliminación del endotelio, NG-nitro-L-arginina e indometacina inhibieron la relajación a la testosterona. En arterias carótidas de conejo diabético tanto la expresión de eNOS, iNOS y COX-2 como la liberación de prostaciclina en respuesta a la testosterona fue mayor que en arterias de conejo control. La testosterona inhibió la contracción arterial inducida por CaCl2, tanto en animales control como animales diabéticos. Estos resultados sugieren que la testosterona relaja la arteria carótida al bloquear la entrada de calcio extracelular. La diabetes aumenta la respuesta vasodilatadora de la testosterona por un mecanismo que al menos incluye un aumento de la actividad moduladora del óxido nítrico endotelial y un aumento de la liberación del vasodilatador COX-2, prostaciclina, más que la ausencia de vasoconstrictor COX-1 tromboxano A2. ARTERIA RENAL. La testosterona relajó la arteria renal de conejo control y diabético, sin diferencias significativas entre ambos. Tanto en arteria renal de conejo control como de diabético, la eliminación del endotelio inhibió la relajación arterial a la testosterona. En arterias con endotelio, la incubación con indometacina, NG-nitro-L-arginina, o con el inhibidor de los canales de K+ tetraetilamonio, no modificó significativamente la relajación arterial a la testosterona en ambos grupos de animales. En arterias sin endotelio, la indometacina aumentó la relajación a la testosterona, tanto en conejos control como en conejos diabéticos. La expresión de eNOS, iNOS y COX-1 y la liberación de tromboxano A2 y prostaciclina en respuesta a la testosterona fue similar en arterias de conejo control y de conejo diabético. Sin embargo, la expresión de COX-2 fue significativamente menor en arteria renal de conejo diabético que en conejo control. La testosterona inhibió la contracción de la arteria renal inducida por CaCl2 en ambos grupos de conejos. Estos resultados sugieren que la testosterona relaja la arteria renal de conejo. Esta relajación está modulada por tromboxano A2 de origen muscular, y está mediada parcialmente por prostaciclina endotelial, e implica el bloqueo de la entrada de Ca2+ al interior celular. A diferencia de lo observado en arteria carótida, la diabetes no modifica los mecanismos implicados en la relajación de la arteria renal a la testosterona.; Cardiovascular disease is the major cause of morbidity and mortality in diabetic patients, which in turn is also associated with low levels of serum testosterone. CAROTID ARTERIES Testosterone induced a relaxation of carotid arteries, which was higher in diabetic than in control rabbits. In control rabbits neither endothelium-removal nor the nitric oxide synthase (NOS) inhibitor NG-nitro-L-arginine (LNA) modified relaxations to testosterone, and the COX inhibitor indomethacin enhanced this relaxation. In diabetic rabbits endothelium removal, LNA or indomethacin inhibited testosterone-induced relaxation. In arteries from diabetic rabbits, eNOS, iNOS and COX-2 expression and testosterone-induced release of prostacyclin resulted enhanced in comparison with control rabbits. Testosterone inhibited CaCl2 contractions of carotid artery both in control and diabetic rabbits. These results suggest that testosterone relaxes carotid artery by blocking extracellular calcium entry. Diabetes enhances the vasodilator response of the carotid artery to testosterone by a mechanism that at least includes an increased modulatory activity of endothelial nitric oxide and an augmented release of COX-2 vasodilator, prostacyclin rather than the absence of COX-1 vasoconstrictor, thromboxane A2. RENAL ARTERIES Testosterone induced relaxation of arteries, without significant differences between control and diabetic rabbits. Both in control and diabetic rabbits endothelium-removal inhibited testosterone relaxant action. In arteries with endothelium, incubation with indomethacin, LNA or tetraethylammonium did not modify relaxations to testosterone neither in control nor in diabetic rabbits. In endothelium-denuded arteries indomethacin enhanced the relaxations to testosterone, both in control and diabetic rabbits. In arteries from diabetic rabbits, eNOS, iNOS and COX-1 expression and testosterone-induced release of thromboxane A2 and prostacyclin were not different from those observed in control rabbits. However, COX-2 expression was lower in diabetic rabbits that in control rabbits. In Ca2+-free medium, addition of CaCl2 contracted previously depolarized arteries. Testosterone inhibited CaCl2 contractions both in control and diabetic rabbits. These results show that testosterone relaxes the renal artery both in control and diabetic rabbits. This relaxation is modulated by muscular thromboxane A2, it is partially mediated by endothelial prostacyclin, and it involves the blocking of extracellular Ca2+ entry. Diabetes does not modify the mechanisms involved in the relaxant action of testosterone in the renal artery.

Efectos musculares y hematológicos del uso de rHuEpo en combinación con el entrenamiento físico. Implicaciones de la demospresina y la hipoxia en el dopaje sanguineo. Estudios in vivo e in vitro.

Wed, 28 Mar 2012 10:42:03 GMT

Efectos musculares y hematológicos del uso de rHuEpo en combinación con el entrenamiento físico. Implicaciones de la demospresina y la hipoxia en el dopaje sanguineo. Estudios in vivo e in vitro. Martínez Bello, Vladimir Essau En la presente Tesis Doctoral hemos querido estudiar, en primer lugar, el efecto que tendría el incremento artificial de la capacidad de transporte de oxígeno, a través del tratamiento con rHuEpo, sobre distintos parámetros musculares así como su implicación en la mejora del rendimiento físico. Son muchos los autores que, tanto en el ámbito clínico (Winearls, Oliver y cols. 1986; Bommer, Muller-Buhl y cols. 1987) como en el ámbito deportivo (Berglund y Ekblom 1991; Lundby, Robach y cols. 2008), han destacado que los beneficios alcanzados con los tratamientos con Epo desbordan con creces su papel como estimuladora de la eritropoyesis. Los posibles efectos de la hormona, a nivel del músculo esquelético, se fundamentan en el reciente descubrimiento de receptores de Epo en este tejido (Scoppetta y Grassi 2004; Lundby, Hellsten y cols. 2008). En el primer estudio de la presente Tesis Doctoral nos planteamos determinar si el tratamiento con rHuEpo podría mediar los procesos de mitocondriogénesis, miogénesis y angiogénesis en el músculo esquelético, así como sus efectos sobre el rendimiento deportivo en animales de experimentación. Los resultados negativos obtenidos en este primer estudio en el que no observamos ninguna modificación en los procesos anteriormente descritos a nivel del músculo esquelético, ni sobre el rendimiento físico, en animales tratados con rHuEpo, a pesar de encontrar un aumento significativo en las diversas variables hematológicas determinadas, nos llevó a diseñar un segundo estudio. En éste nos planteamos determinar el efecto del aumento en la producción endógena de Epo (por la exposición a altitud simulada), en combinación con entrenamiento anaeróbico, sobre distintas adaptaciones musculares y hematológicas y sobre el rendimiento físico. De nuevo, en este caso, no observamos ningún efecto ni a nivel muscular, ni sobre el rendimiento, de la combinación de un protocolo de hipoxia intermitente con entrenamiento anaeróbico, a pesar de encontrar un significativo aumento en las variables hematológicas estudiadas. Los resultados obtenidos en los dos estudios anteriores nos planteron la necesidad de diseñar un tercer estudio conducente a comparar el efecto del tratamiento con rHuEpo con un protocolo de hipoxia intermitente normobárica, sobre las variables hematológicas determinadas por las autoridades antidopaje. Nuestro principal objetivo al plantear este estudio era demostrar que los protocolos de hipoxia intermitente producen modificaciones hematológicas comparables a los tratamientos con rHuEpo. Los resultados obtenidos confirmaron nuestra hipótesis y fundamentaron el diseño experimental del cuarto estudio desarrollado en la presente Tesis Doctoral. En él nos planteamos determinar el efecto de un protocolo de hipoxia intermitente, tras la administración de rHuEpo, con el objetivo de comprobar un posible efecto enmascarador de la policitemia asociada a la hipoxia. Tras confirmar dicho efecto, diseñamos un nuevo protocolo experimental que constituye el quinto estudio de esta Tesis. En este trabajo nos planteamos, en seres humanos, estudiar el efecto hemodiluyente de la administración oral de desmopresina, un análogo de la hormona antidiurética, con un potencial efecto enmascarador del dopaje sanguíneo. Los resultados obtenidos en el segundo estudio planteado en la presente Tesis Doctoral en relación al efecto del entrenamiento anaeróbico, en combinación con la hipoxia, sobre la expresión muscular de PGC-1α y MnSOD, nos condujo a diseñar toda una nueva serie de experimentos (in vitro) en los que determinamos el papel de la electroestimulación en la activación de PGC-1α y MnSOD en animales silvestres y deficientes en PGC-1α. Del mismo modo quisimos estudiar el papel de las ERO en dicho proceso. Estos experimentos, desarrollados en el laboratorio de la Profesora Ylva Hellsten (Departamento de Ciencias del Deporte y del Ejercicio de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Copenhague, Dinamarca) conforman el sexto y último estudio que nos plateamos en esta Tesis.; In this Doctoral Thesis our first aim was to determine the effect of the artificial increment of the oxygen delivery capacity on different muscular parameters and on performance, by using rHuEpo. In our first study we proposed to determine whether rHuEpo treatment could be involved in mitochondrial biogenesis, myogenesis, or angiogenesis in skeletal muscle. We also wanted to test the effects of the hormone on exercise performance in experimental animals. None of the results obtained in this first study presented any changes in the processes described above at the level of skeletal muscle, or in physical performance in animals treated with rHuEpo. In the second study we found no effect on either the skeletal muscle or performance, as a result of the combination of intermittent hypoxia and anaerobic training, despite finding a significant increase in the hematological variables analyzed. The results from these studies led us to devise our third experimental design in which we wanted to demonstrate that an intermittent hypoxic protocol can induce the same hematological modifications as Epo treatments. Results confirmed our hypothesis and underpinned the experimental design of the fourth study developed in this Doctoral Thesis. In this we proposed to determine the effect of intermittent hypoxia on hematological parameters after rHuEpo administration in an animal model. After confirming the role of hypoxia as a masking strategy, we designed the fifth experimental study of this Doctoral Thesis. This is the only human study in the Thesis and we aimed to determine whether administration of desmopressin, a synthetic analogue of vasopressin, could be associated with a significant hemodilution and thus be considered as a masking agent in sports. The results in the second study of this Doctoral Thesis led us to develop a new series of experiments (in vitro) constitute the sixth and last study of the present Doctoral Thesis, in which we proposed to determine the role of reactive oxygen species and PGC-1α in the contraction-induced expression of MnSOD in primary skeletal muscle cells from wild type and knock-out for PGC-1α mice.

Importancia del inicio de la terapia hormonal sustitutiva con estrógenos sobre parámetros de estrés oxidativo y consumo de glucosa in vivo

Tue, 20 Mar 2012 11:12:55 GMT

Importancia del inicio de la terapia hormonal sustitutiva con estrógenos sobre parámetros de estrés oxidativo y consumo de glucosa in vivo López Grueso, Raúl La esperanza de vida se dobló en Europa en el siglo XX. En cualquier etapa de la historia reciente, las mujeres superan en longevidad media a los hombres (hasta un 9.9%). Aunque la base es desconocida, no es atribuible exclusivamente a diferencias sociales, ya que por ejemplo las ratas Wistar hembras viven un 16% más que los machos y en este caso ambos están sometidos a las mismas “condiciones sociales”. Este hecho ha interesado desde hace años a la comunidad científica, publicándose numerosos artículos que han demostrado que estas diferencias de longevidad se fundamentan en parte en diferencias de estrés oxidativo. Los machos poseen un mayor estrés oxidativo que las hembras, pues éstas están protegidas frente al mismo por los estrógenos. Además, se han utilizado los estrógenos como prevención y tratamiento ante diversas patologías (cardiovasculares, neurodegenerativas, etc.) y por su efecto antioxidante, tanto in vivo como in vitro, pero que, en las mujeres, se pierde al aparecer la menopausia. Estudiar las bases moleculares de estas diferencias en relación con la teoría del envejecimiento de los radicales libres y los efectos positivos de la reposición de estrógenos en distintos períodos post-menopausia ha sido el objetivo de la investigación realizada. Para realizar el estudio se planificaron varios protocolos y métodos que se explican a continuación. Se utilizaron ratas hembras Wistar jóvenes (3-4 meses) y viejas (24 meses). Se realizó la ovariectomía de 39 ratas (jóvenes) con un grupo control incluido (SHAM operated) siguiendo un diseño que consistió en: grupo Operación SHAM (n=5) de 3 semanas. OVX 3, 6 ó 9 (semanas tras Ovariectomía), OVX 3E, 3+3E ó 6+3E (semanas tras Ovariectomía más semanas de administración diaria de Estradiol disuelto en vehículo) y OVX 3V, 3+3V ó 6+3V (semanas tras Ovariectomía más semanas de administración diaria de vehículo). Posteriormente, se estudiaron mediante tomografía por emisión de positrones (PET) su metabolismo cerebral de glucosa (diferenciando, además entre un grupo de animales jóvenes y viejos para ver el efecto del envejecimiento) y se sacrificaron, tras los periodos anteriores, los distintos grupos. Entre las medidas realizadas están la determinación de parámetros de estrés oxidativo en diferentes órganos y en mitocondrias aisladas de hígado (MDA, GPx, producción de peróxidos) mediante técnicas de Western Blotting, espectrofotometría y HPLC. Con el plasma sanguíneo se realizó un estudio de los metabolitos presentes por Resonancia Magnética Nuclear (RMN) y obtuvimos el perfil metabólico. En ratas ovariectomizadas disminuye significativamente la actividad de la enzima Glutatión Peroxidasa (GPx) a las 3 semanas, mientras que se revierte con la reposición con estrógenos y no al administrar el vehículo solo (control). Este hecho se repite también cuando el periodo de reposición con estrógenos es más grande (6 y 9 semanas) aunque la disminución en la actividad de la enzima no disminuye tanto como en las semanas siguientes a la ovariectomía (3 semanas primeras) y su recuperación hasta niveles normales también decrece, obteniendo valores similares en la oxidación a lípidos (MDA) y en la producción de peróxido de hidrógeno. En cuanto al consumo de glucosa mediante PET, los resultados indican una disminución con el envejecimiento y ponen de manifiesto el beneficio del tratamiento con estrógenos, solamente si se inicia el tratamiento inmediatamente tras instaurarse la menopausia (ovariectomía). Igualmente ocurre en el perfil metabólico analizado mediante metabolómica (RMN). El tratamiento con estradiol parece ser sólo efectivo si la reposición se produce inmediatamente tras la instauración de la menopausia, y deja de serlo si esperamos varias semanas para comenzarlo. Se hacen necesarios más estudios con animales de laboratorio para extrapolar sus resultados correctamente a los tratamientos en humanos y, así, poder extraerse conclusiones de aplicación clínica.; Females live longer than males in many mammalian species, including humans. This natural phenomenon can be explained on the basis of the mitochondrial theory of aging. Mitochondria are a major source of free radicals in cells. Mitochondria from female rats generate half the amount of hydrogen peroxide than those of males and have higher levels of mitochondrial reduced glutathione. The results of this thesis show that the mitochondria from ovariectomized rats (sacrificed at 3, 6, and 9 weeks -OVX 3, 6 and 9- after surgery) generate higher hydrogen peroxide levels than controls (Sham) but are diminished only if estrogen replacement therapy (ERT) is initiated immediately after induced menopause [there were groups which were given 1 μg/kg/day subcutaneously of 17β-estradiol for three weeks, starting the day after surgery (OVX 3E) or three or six weeks later, for the same period of three weeks (OVX 3+3E and OVX 6+3E)]. The same pattern occurs with glutathione peroxidase (GPx) enzymatic activity in mitochondria showing an increase in this antioxidant enzyme and a recovery of oxidative damage to lipids in heart and plasma after the negative effects produced by ovariectomy. Aging and induced menopause decrease the brain glucose uptake in vivo measured by Positron Emission Tomography (PET) and ERT is only relatively beneficial in the immediate treatment group. This “critical time” to initiate the treatment after ovariectomy reflects similar metabolomic profiles (by Nuclear Magnetic Resonance, NMR) compared with control and young rat groups. The challenge for the future is to find a molecular mechanism that can explain the beneficial effects of ERT and to discover if there are molecules which mimic these effects too.

El deporte en la Medicina Española (1900-1975). Su estudio como causa y como tratamiento de la enfermedad de las revistas médicas

Wed, 14 Dec 2011 12:20:36 GMT

El deporte en la Medicina Española (1900-1975). Su estudio como causa y como tratamiento de la enfermedad de las revistas médicas Quirós Morató, Ana María Se plantea el problema por la falta de trabajos en la historia tanto en la medicina española como a nivel internacional que tratan el deporte como causa y como tratamiento de la enfermedad. Como objetivo general nos planteamos conocer la evolución histórica de los estudios sobre el deporte como causa y como tratamiento de la enfermedad en las revistas médicas españolas entre 1900 y 1975. Como objetivos específicos planteamos: conocer los deportes que fueron objeto de estudio y su variación a lo largo del periodo estudiado, los tipos de enfermedades que produjeron, en qué enfermedades se utilizaron como tratamiento, el perfil profesional de los autores de los trabajos recogidos, las revistas médicas que recogieron los trabajos objeto de estudio y estudiar las características de la relación entre la evolución cronológica y temática observada y el desarrollo de la práctica de los deportes estudiados en España. Se ha tratado el marco histórico: Medicina y deporte, su relación histórica; La historia del deporte en España; La Medicina Deportiva en España El material y método empleados es el siguiente: Se han vaciado fuentes impresas, artículos de revistas impresas en España entre 1900 y 1975 dirigidas a profesionales de la Medicina cuyo tema fuera el deporte como causa y como tratamiento de enfermedad (20 de Medicina General y 2 de Medicina Deportiva). El material encontrado han sido 102 artículos originales y 42 reseñados. Se ha realizado un estudio estadístico descriptivo: distribución de artículos por año, autor, revista, tipo de referencia, producción de autores y materia. Se han estudiado los deportes con mayor presencia en las revistas médicas españolas y obtenido un perfil biográfico de los autores de mayor producción y analizado el contenido de sus artículos.; A problem has arisen due to the lack of work and papers throughout history, both within Spanish medicine and internationally, dealing with the sport as a cause and as disease treatment. The main purpose of the present study is to aknowledge the historical evolution of studies dealing with sport as a cause and treatment of diseases in Spanish medical journals between 1900 and 1975. As specific objectives we aim to determine the sports that were the object of studies and their variation along the above mentioned period, the kinds of diseases they caused, in which diseases they were used as treatments, the professional profile of the authors of the works gathered and to study the features of the relationship between the chronological evolution and subject matter observation and the practice development of the studied sports in Spain. As a historical frame we have dealt with; Medicine and sport, its historical relationship, the history of sport in Spain, Sport medicine in Spain. The methodology and materials used are the following: written sources have been consulted, as well as journal papers printed in Spain between 1900 and 1975 addressed to medicine experts whose topic was the sport as a cause and treatment of diseases (20 related to general medicine and 2 related to sports medicine). The result has been 102 original articles and 42 reports found. A descriptive statistics analysis has been carried out: annual article distribution by year, author, journal, kind of reference, author production and topic. The sports that have been the object of the present study have been those with major presence in Spanish medical journals and a biographical profile of the authors of higher production has been carried out together with an analysis of their papers' content.

Estudio del potencial efecto neuroprotector de fitoestrógenos en el ictus isquémico de rata

Wed, 14 Dec 2011 09:59:31 GMT

Estudio del potencial efecto neuroprotector de fitoestrógenos en el ictus isquémico de rata Castelló Ruiz, María El sistema de los estrógenos es una diana terapéutica relativamente nueva en el tratamiento y/o prevención del ictus. Actualmente no existe un consenso sobre el efecto neuroprotector de los estrógenos, concretamente 17β-estradiol, lo que ha conducido a la búsqueda de alternativas relacionadas. Los fitoestrógenos son un grupo de polifenoles presentes en la dieta humana que poseen similitud estructural con 17β-estradiol, lo que les capacita para unirse a los receptores estrogénicos actuando como agonistas o antagonistas. Las poblaciones orientales soportan una menor incidencia de enfermedades cardiovasculares que las occidentales, hecho que se ha atribuido al consumo elevado de soja, fuente principal de fitoestrógenos del tipo de las isoflavonas. La hipótesis planteada en el presente estudio es “Las isoflavonas contenidas en la soja reducen la gravedad del ictus isquémico, tanto si están presentes como ingredientes dietéticos con anterioridad al ictus, como si se administran en la fase superaguda una vez se ha producido el ictus”. Por tanto, se ha diseñado desde una doble vertiente: la neuroprotección preventiva (ingesta de una dieta rica en isoflavonas) y la neuroprotección aguda (administración de isoflavonas puras en la fase superaguda del ictus). Todos los objetivos planteados incluyen dos variables: el género, animales Wistar macho versus hembra, y la hipertensión, animales normotensos Wistar-Kyoto versus hipertensos (Spontaneously Hipertensive Rats). El modelo experimental utilizado ha sido el de isquemia focal transitoria de 90 minutos seguida de 3 días de reperfusión, por oclusión de la arteria cerebral media mediante la técnica del filamento intraluminal. Para el estudio de la neuroprotección preventiva se alimentó a los animales de forma prolongada con dos dietas, una rica y otra libre de fitoestrógenos, antes de inducirles la isquemia cerebral. Para el estudio de la neuroprotección aguda se administraron intraperitonealmente isoflavonas puras (genisteína, daidzeína o biocanina A) 30 minutos después de la inducción de la isquemia cerebral. Las conclusiones obtenidas son las siguientes: 1.- La presencia de altas concentraciones de isoflavonas en la dieta no impide ni atenúa el desarrollo de hipertensión en ratas SHR, ni modifica la presión arterial en ratas normotensas. Por lo tanto, estos resultados no apoyan la eficacia de la intervención nutricional con isoflavonas en el control de la hipertensión. 2.- La presencia de altas concentraciones de isoflavonas en la dieta no influye en la hemodinámica cerebral y sistémica durante el episodio de isquemia-reperfusión. La implicación es doble: por una parte las isoflavonas no determinan un perfil hemodinámico cerebral durante la isquemia-reperfusión que pudiera considerarse más favorable sobre el posterior daño cerebral; y por otra parte la hipertensión no determina un perfil hemodinámico cerebral durante la isquemia-reperfusión que pudiera considerarse más desfavorable sobre el posterior daño cerebral. 3.- Atendiendo al estado neurológico y al volumen de la lesión (infarto), la dieta formulada con altas concentraciones de isoflavonas confiere neuroprotección en ratas Wistar macho y hembra, pero no en ratas WKY o SHR macho. El reducido volumen de infarto de las ratas WKY cuestiona la idoneidad de esta cepa como control normotenso de la cepa SHR en los estudios sobre la influencia de la hipertensión en el ictus. Ahora bien, si se considera la cepa Wistar como control positivo de la cepa SHR, cabe concluir que las isoflavonas confieren neuroprotección primaria en condiciones de normotensión pero no de hipertensión. 4.- La administración de isoflavonas puras, concretamente genisteína, muestra efecto neuroprotector en ratas Wistar macho y hembra, y por lo tanto deberían tenerse en cuenta como agentes neuroprotectores capaces de limitar el daño cerebral isquémico cuando se administran en la fase aguda del ictus. Esta sugerencia se apoya en los resultados obtenidos en condiciones de normotensión, pero no en condiciones de hipertensión.; Aim. Phytoestrogens are naturally ocurring plant chemicals with estrogen-like structure and/or actions. Since phytoestrogens have been shown to have beneficial effects on the central nervous system, we assessed the hypothesis that: (1) soy-derived isoflavones contained in current laboratory rodent diets improve stroke outcome in normotensive (male and female Wistar rats), hypertensive rats (Spontaneously Hypertensive Rats, SHR) and its normotensive controls Wistar-Kyoto (WKY) rats; and (2) the pure isoflavones daidzein, genistein and biochanin A can mimick such a neuroprotective effect. Methods. (1) To determine the effect of dietary isoflavones, the animals were subdivided in two groups: one fed a soy-based diet and the other with a natural isoflavone-free diet. (2) The acute effects of pure isoflavones were studied by feeding rats with a synthetic isoflavone-free diet. Transient focal cerebral ischemia (90 min.) was induced to all the animals by middle cerebral artery occlusion following the intraluminal thread technique. Cerebro-cortical laser-Doppler flow (cortical perfusion, CP), arterial blood pressure, core temperature, PaO2, PaCO2, pH and glycemia were measured before, during and after MCAO. Animals destined to the study of acute effects of isoflavones received 1-10 mg/kg/day i.p. of daidzein, genistein or biochanin A from 30 min. after ischemia until 3 days reperfusion. At that time neurological examination and cerebral infarct volume were measured. Results. (1) Wistar male and female rats, but not SHR or WKY rats, fed the soy-based diet had a better neurological status and lower infarcts volumes than rats fed the isoflavone-free diet. Consumption of dietary isoflavones did not modify arterial blood pressure either in normotensive or in hypertensive rats. (2) Acute treatment with genistein 1 mg/kg/day reduced the mean total infarct volume and improved the neurological score in Wistar male and female rats, but not in SHR or WKY rats. Conclusion. Our results lend support to the neuroprotective effect of both dietary (preventive neuroprotection) and pure isoflavones (pharmacological neuroprotection) in ischemic stroke.

Efecto del entrenamiento físico sobre la mitocondriogénesis y la expresión de enzimas antioxidantes en el músculo de animales jóvenes, viejos y knockout de PGC-1 ALPHA

Wed, 14 Dec 2011 09:41:41 GMT

Efecto del entrenamiento físico sobre la mitocondriogénesis y la expresión de enzimas antioxidantes en el músculo de animales jóvenes, viejos y knockout de PGC-1 ALPHA Nascimento, Ana Lucia El envejecimiento humano está asociado a una pérdida de masa muscular que se inicia en la cuarta década de la vida con una pérdida de fuerza de un 1% al año y que se acelera con el transcurso de los años. Las causas del envejecimiento del organismo son complejas. Una amplia variedad de procesos se considera que están implicados en el declive de los distintos aparatos y sistemas con el paso de los años. Dentro los factores implicados en la pérdida de la funcionalidad del músculo esquelético podemos destacar: la muerte celular programada, el estrés oxidativo, las alteraciones en la síntesis de proteínas, la inflamación, las alteraciones hormonales, el desuso y las disfunción mitocondrial. El objetivo general de la presente tesis es determinar el posible papel de PGC- 1 (un coactivador transcripcional descubierto en 1998) en la prevención de los efectos del envejecimiento sobre la masa muscular, el contenido mitocondrial y la defensa antioxidante en animales de experimentación. Para el desarrollo de la presente tesis doctoral utilizamos un total de 24 ratas Wistar (12 jóvenes y 12 viejas) y 20 ratones C57BL/6J (10 silvestres y 10 deficientes de PGC-1 ). Los animales fueran divididos en dos grupos experimentales: entrenados y no entrenados. Los animales jóvenes y viejos realizaron un entrenamiento aeróbico de 3 semanas de duración, mientras que los ratones silvestres y deficientes PGC-1 realizaron un entrenamiento aeróbico de 5 semanas de duración. Transcurrido el período de entrenamiento los animales fueron sometidos a una prueba de resistencia y sacrificados. Los tejidos (distintos tipos musculares) y la sangre fueron extraídos y congelados. Se analizaron: la expresión de factores de transcripción relacionados con la biogénesis mitocondrial (PGC-1 , NRF-1 y Tfam), la expresión de proteínas marcadoras de contenido mitocondrial (citocromo c y citocromo c oxidasa), la expresión de factores miogénicos en el músculo esquelético (MioD y miogenina), la expresión de proteínas oxidadas en el músculo esquelético y en el plasma, la expresión de enzimas antioxidantes (catalasa y Mn-SOD) y el rendimiento físico de los animales. Nuestros resultados demuestran que el proceso de biogénesis mitocondrial se encuentra bloqueado en los animales viejos y deficientes en PGC-1 , lo que se manifiesta en una disminución del rendimiento aeróbico de estos animales. Las similitudes observadas entre el modelo de animales deficientes en PGC-1 y el modelo de animales viejos, indican que la disfuncionalidad de PGC-1 podría ser la causa de las alteraciones mitocondriales que se producen en el músculo esquelético durante el envejecimiento. En relación al proceso de miogénesis, nuestros resultados muestran un aumento en la expresión de la miogenina en el grupo de animales viejos, lo que consideramos se puede interpretar como una respuesta compensatoria para minimizar las pérdidas de células musculares asociadas al envejecimiento. En relación a la expresión de enzimas antioxidantes, la catalasa se encuentra aumentada en los músculos de animales viejos y deficientes en PGC-1 como respuesta al aumento de estrés oxidativo (en forma de proteínas carboniladas) encontrado en los músculos de ambos grupos experimentales. El principal hallazgo de nuestra investigación es que el entrenamiento de corta duración no supone un estímulo suficiente para la activación del proceso de biogénesis mitocondrial en el músculo esquelético de los animales viejos. La escasa reactividad de PGC-1 al estímulo del ejercicio, requiere del estudio de estrategias alternativas (nutricionales y/o farmacológicas) para mejorar la inducción de este importante coactivador transcripcional y su aplicación en el tratamiento y prevención de la sarcopenia senil.; Human aging is associated with a loss of muscle mass that begins in the fourth decade of life with a loss of strength of 1% per year and is accelerated over the years. The causes of aging of the body are complex. A wide variety of processes are considered to be implicated in the decline of the various devices and systems over the years. Among the factors involved in the loss of skeletal muscle function can include: programmed cell death, oxidative stress, alterations in protein synthesis, inflammation, hormonal changes, disuse and mitochondria ldysfunction. The overall objective of this thesis is to determine the possible role of PGC- 1& (a transcriptional coactivator discovered in 1998) in preventing the effects of aging on muscle mass, mitochondrial content and antioxidative defense in experimental animals. The main finding of our research is that the short-term training is not a sufficient stimulus to activate the process of mitochondrial biogenesis in skeletal muscle of old animals. The low reactivity of PGC-1& to the stimulus of exercise, requires the study of alternative strategies (nutritional and / or pharmacological) to improve the induction of this important transcriptional coactivator and its application in the treatment and prevention of senile sarcopenia.

Estudio de la memoria de color en pacientes con diabetes tipo 1

Tue, 13 Dec 2011 07:46:08 GMT

Estudio de la memoria de color en pacientes con diabetes tipo 1 Pérez Baylach, Carmen María En esta Tesis Doctoral estudiamos el efecto de la diabetes tipo 1 sobre la memoria de color. Los observadores con diabetes se clasifican en 3 grupos: 31 sujetos con fondo de ojo normal, (GDFON) 25 sujetos con retinopatía no proliferatíva, (GDRNP), y 29 sujetos con retinopatía proliferativa sometidos al tratamiento de fotocoagulación con laser, (GDTL). Determinamos, en el espacio CIELAB, las variaciones medias entre una muestra presente (test de referencia) y otra yuxtapuesta (igualación cromática simultánea) o que se recuerda (igualación cromática por memoria), correspondientes a las componentes de la diferencia de color (diferencia de claridad, ΔL*, diferencia de croma, ΔC*ab, y diferencia de tono, ΔH*ab), y a la diferencia total de color, ΔE*ab. A partir de aquí, comparamos los resultados obtenidos con cada uno de los tres grupos, entre sí y con los de un grupo control, GC, formado por 31 observadores -no diabéticos. Finalmente, medimos y comparamos los tiempos medios que precisan cada una de estos cuatro grupos en escoger, con ambos métodos de igualación cromática, la muestra que más se asemeja al test de referencia (tiempo de respuesta). Para realizar la experiencia seleccionamos 5 muestras de color, tests de referencia, de un Atlas de color Munsell. Para el estudio con cada uno de los tests utilizamos 20 muestras de comparación escogidas de un Atlas Munsell semejante al primero. De los resultados obtenidos se concluye lo siguiente: 1) Hemos comprobado que, también en el caso de los diabéticos, la igualación del color por memoria es peor que la simultánea (p ≤ 0.005). 2) Independientemente del color del test original, el grupo GDTL iguala el color del test peor que el grupo GC. Asimismo, el grupo GDTL iguala peor que los grupos GDFON (para rosa y naranja), y GDRNP (para violeta, rosa y naranja). 3) El grupo GDFON recuerda mejor el naranja original que los grupos GC (p=0.026) y GDTL (p=0.040). 4) Las diferencias entre grupos con los descriptores perceptuales del color (claridad, tono y croma) recordados no son significativos para violeta, verde azulado y rosa. 5) El grupo GDTL recuerda el verde amarillento original más claro que los grupos GC (p=0.008), GDFON (p=0.007), y GDRNP (p=0.004). 6) El grupo GC recuerda el croma del verde amarillento y del naranja más cromático que los grupos GDFON Y GDRNP; para el naranja, el croma es el descriptor perceptual que más contribuye a la diferencia de color media entre los grupos GDFON y GC. 7) Mientras el grupo GDFON recuerda el tono del verde amarillento mejor, aunque más amarillento, los grupos GC, GDRNP y GDTL lo recuerdan más verdoso. Para el naranja, el grupo GDRNP recuerda el tono original peor, más amarillento, que el de GC (p=0.015), que además, lo recuerda más rojizo. 8) Para verde azulado y naranja todos los grupos tardan el mismo tiempo en igualar. Los grupos más lentos son el GDTL para violeta, y el GC para rosa; el grupo GDFON es el más rápido tanto con verde amarillento como con rosa. Observamos que, independientemente del color del test original, los tres grupos de diabéticos tardan en igualar por memoria la mitad de tiempo que el grupo GC (p≤0.005). Según estas conclusiones diseñamos 2 tests basados en la igualación cromática simultánea y por memoria, que se podrían utilizar en atención primaria y controles médicos rutinarios. Con ellos detectaríamos si el sujeto padece o no diabetes, y en su caso, el tipo de retinopatía que presenta. Sería un test fácil de utilizar, barato, inocuo y muy útil ya que evitaría las visitas al oftalmólogo de pacientes que realmente no lo necesitan y detectaría antes la enfermedad.; Effect of type 1 diabetes on the memory of colour. The observed diabetic subjects are classified in three groups: 31 subjects with healthy rear of the eye, (GDFON), 25 subjects suffering from non-proliferative retinopathy, (GDRNP), and 29 subjects suffering from proliferative retinopathy treated with laser photocoagulation, (GDTL). We determine, on CIELAB space, the average change between a present sample and a yuxtaposed or remembered one, corresponding to the components of the change in colour (ΔL*, ΔC* ab, ΔH* ab), and to the total difference in colour, ΔE*ab. From this point, we compare the results obtained in each of the three groups, among them and with the results obtained in a control group, (CG), 31 observed non diabetic subjects. To perform the experiment we select 5 reference tests, from a Munsell colour system. To conduct the study, with every test we use 20 matching samples selected from a Munsell colour system. Conclusions: 1) The balancing of colour done by memory is worse than the one which occurs simultaneously (p ≤ 0.005). 2) GDTL balances the colour on the test worse than GC. GDTL balances colour worse than GDFON (concerning pink and orange) and GDRNP (violet, pink and orange). 3) GDFON recalls original orange better than GC (p=0.026) and GDTL (p=0.040). 4) Concerning orange, the chroma is the perceptual descriptor that contributes the most to the average change of colour between GDFON and GC. 5) Concerning orange, GDRNP recalls the original hue worse, more yellowish, than GC (p=0.015), which in spite of everything, recalls it more reddish. According to these conclusions we design two tests based on the chromatic balancing, simultaneous and by memory, which could be used in routine medical checkups.We would detect if the subject suffers from diabetes or not, and in case the tests were positive, we could establish the kind of retinopathy. It would not only be an easy to use test but it also would be cheap, harmless and really useful as it would save appointments at the ophthalmologist to pacients who really don't need it and we would detect the disease earlier.

Estudio sobre parámetros mecánicos y distancia de golpeo de Bandal Chagui de Taekwondo

Tue, 12 Apr 2011 19:07:20 GMT

Estudio sobre parámetros mecánicos y distancia de golpeo de Bandal Chagui de Taekwondo Falcó Pérez, Coral En este estudio se analizan los parámetros mecánicos fuerza de impacto (FI), tiempo de reacción (TR), tiempo de movimiento (TM), tiempo total de respuesta (TT) y dominancia, en la patada circular o Bandal Chagui en Taekwondo, basado en la regulación de la distancia de golpeo (ED1, ED2 y ED3). Para ello, se ha utilizado un sistema de nueva creación formado por una plataforma de contacto, una plataforma de fuerzas, un led de luces y un maniqui. La muestra esta compuesta por 51 taekwondistas (22 medallistas y 29 no medallistas; 37 varones y 19 mujeres; 42 diestros y 9 zurdos) de la Comunidad Valenciana con una media de edad de 24.49 años (DT = 5.94), una media de peso de 70.91 kg (DT = 12.95) y una longitud de pierna de 1.03 metros (DT = .06). En cuanto a la fuerza de impacto, los resultados muestran que los medallistas golpean con una mayor fuerza de impacto que los no-medallistas desde la distancia larga (D3) con ambas piernas y, desde la distancia corta (D1) con la pierna izquierda. Asimismo, los varones golpean con una mayor fuerza de impacto que las mujeres desde todas las distancias, excepto desde la distancia media (D2) con la pierna izquierda. Por otra parte, en el género varón, el peso tiene una relación positiva con la fuerza de impacto.
En cuanto al tiempo de reacción, existen diferencias entre medallistas y no-medallistas desde la distancia media (D2) y larga (D3) con la pierna izquierda, mientras que el género no influye en el tiempo de reacción. En el tiempo de movimiento, no existen diferencias entre medallistas y no-medallistas ni entre varones y mujeres. Al mismo tiempo, el tiempo de reacción tiene una relación negativa con el tiempo de movimiento. Por su parte, los medallistas muestran un menor tiempo total de respuesta que los no-medallistas desde la distancia larga (D3) con la pierna izquierda, mientras que los varones golpean en un menor tiempo total de respuesta que las mujeres desde la distancia corta (D1). En cuanto a los análisis realizados teniendo en cuenta la dominancia, los medallistas muestran una asimetría en el tiempo de reacción desde la distancia larga (D3), mientras los no-medallistas muestran una asimetría en el tiempo total de respuesta desde las tres distancias planteadas (ED1, ED2 y ED3) y, en la fuerza de impacto desde la distancia corta (D1). El género varón muestra una asimetría en la fuerza de impacto desde la distancia corta (D1), mientras que en el género mujer no existen diferencias entre la pierna dominante y no-dominante. Así pues, la distancia de ejecución es un factor a tener en cuenta en la realización de una patada circular o Bandal Chagui medido con un sistema capaz de obtener datos objetivos del rendimiento mecánico mediante la estandarización de un protocolo, permitiendo diferenciar a los sujetos en función del nivel competitivo y del género, siendo una herramienta útil en el entrenamiento.; We analyzed the mechanical parameters impact force (FI), reaction time (TR), movement time (MT) and total response time (TT) and dominance in a roundhouse kick among three execution distances. To this end, a new system based in a contact platform, force platform, a led and a mannequin was used. The sample was composed by 51 taekwondo players (22 medallist and 29 non medallist; 37 male and 19 female) aged from 16 to 31 years (M = 24.49; S.D. = 5.9), weighing from 46 to 101 kg (M = 70.91; SD = 12.91) were selected to participate in the study. Medallists kicks with a higher FI from the long distance with both legs and from the shortest one with the left leg. Men kick with higher FI than women from all distances, except from the medium distance with the left leg. Significant differences have been found between medallists and non-medallist for RT from medium and large distance with the left leg, without differences among genere. No differences have been fount among movement time. Reaction time and movement time has a negative relation. Medallist had a less TT than non-medallist from the large distance with the left leg, while men kick with less TT than women from the shortest one. Medallist showed an asymmetry in RT from the large distance, while for non-medallist this asymmetry is showed in TT from all distances and in FI from the shortest distance. The execution distance is a parameter to take into account into a roundhouse kick performance.

Estudio sobre parámetros mecánicos y autoeficacia física percibida en la patada "Dolio Chagui" de Taekwondo

Tue, 12 Apr 2011 19:07:19 GMT

Estudio sobre parámetros mecánicos y autoeficacia física percibida en la patada "Dolio Chagui" de Taekwondo Estevan Torres, Isaac El taekwondo es un deporte de lucha con golpeo donde se pueden utilizar tanto puños (para golpear al pecho) como piernas (para golpear al pecho y a la cara). Sin embargo, las piernas se utilizan en mayor medida que los puños.
Durante el combate, los deportistas mantienen una distancia, denominada distancia de combate o de ejecución, que es clave para el éxito deportivo.
Entre las acciones a realizar, el Dolio Chagui o patada circular a la cara, ofrece una mayor posibilidad de puntuar que las patadas dirigidas al pecho.
En el presente estudio se analizan diversos parámetros mecánicos en la patada Dolio Chagui de taekwondo. Por otro lado, hemos comenzado a estudiar un parámetro psicológico como es la autoeficacia percibida en taekwondistas. Y además, relacionando las variables psicológicas y las mecánicas, hemos pretendido analizar si la percepción de eficacia física del atleta puede predecir el rendimiento objetivo de los mismos.
En el estudio participaron 52 deportistas con un mínimo de 4 años de experiencia en la práctica del taekwondo y una frecuencia de entrenamiento de al menos 3 veces por semana. La muestra se dividió en cuatro grupos según el nivel (expertos y promesas) y según el género (varones y mujeres).
En el análisis mecánico se valoraron, desde tres distancias de ejecución, las siguientes variables: fuerza máxima de golpeo, fuerza relativa de golpeo, tiempo de reacción, tiempo de ejecución, tiempo total de respuesta y velocidad media de ejecución. Para ello se utilizó un sistema de adquisición de datos compuesto por una plataforma de fuerzas, una plataforma de contacto, una cinta de leds, un microcontrolador y un PC. En el análisis psicológico se valoró la autoeficacia física percibida utilizando la escala PSE (Ryckman et al., 1982) formada por dos subescalas: la habilidad física percibida y la autopresentación física.
Los resultados muestran que la distancia de ejecución condiciona los datos mecánicos de las patadas. En esa línea, independientemente del nivel de los deportistas, los varones golpean con una fuerza máxima mayor que la de las mujeres. Además, la fuerza de golpeo se considera un parámetro mecánico susceptible de mejora por medio del entrenamiento. Asimismo, los deportistas varones considerados expertos, generan mayor fuerza por kilogramo de masa corporal (fuerza relativa de golpeo) que el resto de taekwondistas. Por otro lado, se considera que los deportistas expertos varones, realizan la patada Dolio Chagui con mayor eficacia que el resto de deportistas.
En cuanto a los sistemas de valoración utilizados, el sistema de adquisición de datos mecánicos nos permite obtener información cuantificable, comparable y fiable. Por su parte, la utilización de cuestionarios validados como por ejemplo la escala de autoeficacia física percibida, nos permite comparar los resultados con otros deportes, y avanzar en el estudio de taekwondo. En este sentido, los taekwondistas varones se perciben más eficaces físicamente que las mujeres. Sin embargo, a nivel expertos, la percepción de eficacia y habilidad física de varones y mujeres, es similar.
Finalmente, el PSE predice algunos parámetros mecánicos como por ejemplo, la velocidad media de ejecución y la fuerza máxima de golpeo, permitiendo relacionar la eficacia percibida con el rendimiento del deportista.; Taekwondo is a combat sport well known for its kicks. The most frequently used kicks in competition are roundhouse kicks. This study analyses one of the most common roundhouse techniques, the Dolio Chagui (roundhouse kick to the head).
During the combat, one of the major factors that regulate the kick is the execution distance (ED), or combat distance, which may be defined as the horizontal distance between the competitor´s front foot and the objective to be hit.
In our study maximum impact force (Fmax), relative impact force (Frel) execution time (TE), reaction time (TR), total time (TT) and execution mean velocity (Vm) in relation to execution distance were measured using a mechanical data acquisition system. On the other side, the physical self-efficacy scale (PSE) by Ryckman et al. (1982) has been used to measure individual perception of self-efficacy in participants.
52 taekwondo players participated in the study; they were divided into four groups in function of the level (experts and promises) and the gender (male and female). All the athletes have competition experience of at least 4 years and train for at least 3 hours per week.
The results showed that execution distance is influential in mechanical data of the Dolio Chagui. Following this viewpoint, male taekwondo players executed the Dolio Chagui with greater Fmax than female. Therefore, Fmax could be improved by the training. On the base of some mechanical results, expert male taekwondo players executed Dolio Chagui with more efficiency than any other group.
Psychological results indicate that males rated higher physical self-efficacy than females. However, similar results were obtained for expert level between males and females.
Finally, some mechanical parameters (execution mean velocity and maximum impact force) have been predicted by the PSE. Therefore, it allows establish a relationship between the self-efficacy and the taekwondo players' performance.

The importance of the nuclear glutathione in the Cell Proliferation

Tue, 12 Apr 2011 19:07:19 GMT

The importance of the nuclear glutathione in the Cell Proliferation Markovic, Jelena The present thesis offers an insight in the importance of nuclear GSH in cell proliferation.
The research was performed in three different cellular models of diverse proliferating activity: immortalized mouse embryonic fibroblasts 3T3, mammary adenocarcinoma cell line MCF7 and primary embryonic neuralonal culture. The results presented here provide evidence that suggest that the relationship between GSH level and telomerase activity, previously described by our group for 3T3 fibroblasts is a common phenomenon in mammalian cells. Reduced glutathione emerged as a driving force of cell cycle progression; high level of GSH coincided with the peak of telomerase activity and preceded the exponential phase of cell growth in all three cell types analyzed. Moreover, the comparative studies of three distinct proliferating models revealed that the level of GSH corresponded to the intensity of the proliferation and clearly correlated with the level of DNA synthesis. This finding inspired the focus on the nuclear compartmentalization of GSH. Interestingly, nuclear localization of GSH was observed before the exponential phase of cell growth in all three cell types, while the GSH distribution within the cell was uniform when the cells stopped proliferating. Comprehensive analysis of the nuclear GSH levels along the cell cycle, and the experiments with the depletion of nuclear GSH conducted in 3T3 fibroblasts, provided further evidence on crucial importance of nuclear GSH for the onset of cell proliferation. In the attempt to elucidate the possible mechanism of nuclear GSH compartmentalization, we have found no evidence either of active GSH transport or of its de novo synthesis in the nucleus. The implication of bcl2 in nuclear transport of GSH was evaluated in the study of MCF7 cells over-expressing this protein. In this model, bcl2 caused an early and striking increase of total cellular glutathione, nuclear GSH and telomerase activity; unexpectedly, these alterations induced no significant effect on cell proliferation.
Based on these findings we have been able to draw a series of conclusions:
The level of cellular glutathione in the particular cell line could define its proliferating capacity. Its variations along the cell culture dictate the rhythm of cell proliferation, possibly by the modulation of redox sensitive cell cycle regulatory proteins.
The telomerase activity is highly sensible to the cellular redox state, regardless of the cell type, its inherent proliferation capacity or the origin of the cells. The dependence of the cell cycle progression on the level of glutathione could be attributed, at least in part, to its modulation of telomerase activity
The nuclear compartmentalization of glutathione is a prerequisite for the onset of the exponential phase of the cell growth. The redox state of nuclear proteins, defined by the glutathiolation and oxidation, varies significantly with the cell proliferation activity.
The depletion of nuclear glutathione severely impairs the cell cycle progression
During the changes in the nuclear membrane that precede the cell division, nuclear Bcl-2 could facilitate the translocation of glutathione to the cell nucleus. The overexpression of bcl-2 induced an early increase of the total glutathione level, telomerase activity and nuclear GSH compartmentalization.

In summary, our results reveal the importance of nuclear GSH compartmentalization in early phases of cell proliferation. This study suggests that the control of the cell cycle progression from G1 to S phase is dependent on elevated nuclear GSH levels and originates from its influence on telomerase activity and DNA synthesis.; Integridad celular se defiende en el núcleo, en su "software" - el acido desoxiribonucleico (ADN) que controla los procesos celulares atreves de la regulación de la expresión génica. El papel protector del glutatión (GSH) sobre el ADN, en su síntesis de ADN y en el mantenimiento de organización del matriz nuclear ha sido claramente demostrado. La gran diversidad de procesos vitales dependientes del glutatión y realizados en diferentes orgánulos de la célula implica la existencia de mecanismos que controlarían su concentración y garantizarían el ambiente adecuado en cada compartimiento. El núcleo cambia dramáticamente durante las diferentes fases del ciclo celular, por lo tanto los estudios de la compartimentación nuclear del GSH tienen que tener en cuenta esta dinámica celular. El objetivo de la presente tesis era investigar la importancia del nivel de GSH y su distribución celular, especialmente la compartimentación nuclear, en la proliferación celular y posibles mecanismos involucrados en el control del dicho fenómeno. Los resultados obtenidos nos han permitido sacar una serie de conclusiones:
El nivel de glutation celular puede determinar la capacidad proliferativa de una línea celular, posiblemente vía la modulación de las proteínas reguladoras del ciclo celular sensibles al estado redox. La actividad de la telomerasa, altamente sensible al estado redox, independientemente del tipo celular, su inherente capacidad proliferativa o la especie de la que procede el cultivo celular puede ser vínculo entre la progresión del ciclo celular y el nivel de glutation.
La compartimentación nuclear del glutation es imprescindible en el principio de la fase exponencial del crecimiento celular.
El estado redox de las proteínas nucleares, definido por su glutationilacion y oxidación, varía significativamente con la actividad proliferativa de las células.
La depleción del glutation nuclear interfiere gravemente con la progresión del ciclo celular.
La sobre expresión del Bcl-2 induce el incremento del nivel del glutation celular, de la actividad telomerasa y de la compartimentación nuclear del GSH.

El nivel de GSH y su compartimentación nuclear son de crucial importancia para el inicio de la proliferación celular. El fenómeno parece universal, confirmado en cultivos celulares provenientes de diferentes especies y con distintos niveles de proliferación.

Fenómenos mitocondriales y nucleares relacionados con la resistencia a la apoptosis. Importancia del estrés oxidativo.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:18 GMT

Fenómenos mitocondriales y nucleares relacionados con la resistencia a la apoptosis. Importancia del estrés oxidativo. Judith Mora, Nancy En el presente trabajo se ha estudiado la relación entre el núcleo y la mitocondria y la importancia de la compartimentación del GSH durante la resistencia a la apoptosis inducida por el tratamiento con cisplatino. Así mismo, se ha evaluado la implicancia de la proteína bcl-2 en la compartimentación del GSH como mecanismo de resistencia a la muerte por apoptosis. Para ello se ha utilizado la cepa celular MCF7 wild type y un homólogo que sobre-expresa la proteína bcl-2.
Los resultados muestran que el tratamiento con cisplatino detiene las células en la fase de proliferación, lo que provocaría la detención del ciclo celular y la muerte celular por apoptosis. La proliferación celular se desarrolla dentro de un determinado rango de niveles de ROS, la detención de las células en la fase de proliferación llevaría al incremento de los niveles de ROS. A su vez, el calcio también se incrementan a causa del tratamiento y se dispone en forma de agregados posiblemente dentro de la mitocondria. Las mitocondrias cumplirían una función de protección al disminuir el calcio libre en el citoplasma. La disposición perinuclear de las mitocondrias permitiría proteger al núcleo, aislándolo de las posibles señalizaciones causadas por el incremento desmedido del ión. El aumento de los niveles de ROS y de calcio provocarían la permeabilización de la membrana mitocondrial interna, lo que induciría la apertura de los poros de permeabilidad transitoria y así se produciría la disminución del potencial de membrana mitocondrial. La alteración de la permeabilidad mitocondrial llevaría la liberación del citocromo-c al citoplasma, lo que eventualmente promovería la muerte celular por apoptosis.
En respuesta al tratamiento, se modificaría la distribución de las mitocondrias y posteriormente se inducirían cambios en la morfología mitocondrial. Las mitocondrias perderían su forma tubular alargada por una puntiforme. Estos eventos constituirían estrategias de resistencia a la apoptosis. Los cambios en la distribución mitocondrial no parecen ser ocasionados por alteraciones en los microtúbulos del citoesqueleto. Por su parte, los cambios morfológicos detectados podrían relacionarse con la segregación de las mitocondrias disfuncionales. Los procesos de fusión y fisión cumplirían una función como mecanismo de control de calidad capaz de gobernar el recambio mitocondrial, esto permitiría la remoción de las mitocondrias potencialmente disfuncionales. De esta manera, las mitocondrias afectadas por el tratamiento, con un potencial de membrana despolarizado no intervendrían en eventos de fusión pero si sufrirían eventos de fisión. Se originarían mitocondrias pequeñas y despolarizadas, que podrían ser eliminadas por autofagia.
Las células supervivientes presentan un mayor nivel de GSH y una clara compartimentación nuclear y mitocondrial. Mientras que en las células apoptóticas el nivel de GSH es bajo y homogéneo. Los resultados muestran que la compartimentación de GSH en el núcleo y las mitocondrias podrían ser eventos clave en la resistencia celular a la apoptosis. Es posible que el GSH pueda pasar de la mitocondria al núcleo, a través del retículo endoplasmático, dependiendo de las necesidades celulares al momento de resistir a un estímulo apoptótico. Así mismo, la sobre-expresión de la proteína bcl-2 se relaciona con la mejor resistencia al tratamiento con cisplatino. La proteína bcl-2 cumpliría un papel anti-apoptótico relacionado con la señalización y regulación de las vías de muerte celular y también podría desempeñar un papel protector ante el estrés oxidativo inducido por el cisplatino e influir en el incremento del nivel de GSH celular y su compartimentación.; The alterations of cellular redox state and calcium homeostasis during apoptosis induce the orchestrated response of nucleus and mitochondria. The mitochondrial morphology and distribution (mitochondrial fusion and fission) could represent a key factor in the nucleus-mitochondrial cross talk. Bcl-2 overexpression was demonstrated to increase nuclear glutathione concentration and thus could provide the apoptosis resistance at nuclear level, apart from its well documented effect on mitochondria. In order to elucidate the sequence of events that takes place in the cytoplasm, mitochondria and nucleus and the importance of bcl2, during apoptosis, a time course analysis of the effect of cisplatin at [10M] and [50M] on MCF7 cells WT and MCF7 that overexpress bcl-2 was performed. The cell cycle, ROS level and the mitochondrial transmembrane potential was studied by flow cytometry; the cellular level of reduced glutathione (GSH) by spectrophotometry, and the confocal microscopy was used to study compartmentation of GSH, mitochondrial distribution, apoptosis and calcium.
Bcl-2 overexpression conferred increased apoptosis resistance. Effect on the cell cycle was doses dependent: the growth arrest occurred in G2/M phase with the [10M] and in G0/G1 with the [50M] cisplatin. Mitochondrial perinuclear arrangement was an early event, followed by the decrease in mitochondrial transmembrane potential. The early and doses dependent increase in calcium level was followed by its perinuclear distribution, and release to the cytoplasm. The GSH level and nuclear compartmentation were increased in the cells that showed no signs of apoptosis. All this events were delayed or less significant in MCF7 bcl-2 cells.
This thesis showed that the nuclear and mitochondrial GSH compartimentation, together with the processes of mitochondrial fusion and fission represent key events in the apoptosis resistance of cancer cells. The overexpresion of the BCL-2 confers the protection from the oxidative stress induced by the cisplatin, possibly through the increase in the level of GSH and changes in its compartimentation pattern. It is possible that the GSH could translocate from the aggregated perinuclear mitochondria, through the endoplasmic reticulum to the nucleus, as a part of the successful antiapoptotic strategy.

Ventilación no invasiva mediante ventilador volumétrico convencional en la insuficiencia respiratoria aguda pediátrica.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:17 GMT

Ventilación no invasiva mediante ventilador volumétrico convencional en la insuficiencia respiratoria aguda pediátrica. Flor Macián, Eva Mª La Insuficiencia respiratoria aguda (IRA) constituye una de las principales causas de ingreso en las UCIPs. La ventilación no invasiva (VNI), es decir, sin intubación endotraqueal ni traqueostomía, supone una alternativa a considerar en el tratamiento de estos pacientes.
Existen numerosos estudios publicados sobre su eficacia en pacientes adultos con IRA para evitar la intubación y reducir la mortalidad. Sin embargo, su papel en la IRA pediátrica todavía no está bien definido.
Uno de los principales inconvenientes en la infancia surge a la hora de escoger el material adecuado para aplicarla. En pediatría se utilizan casi exclusivamente los ventiladores específicos de VNI. Sin embargo, por su alto coste y su todavía escasa aplicación, estos equipos no están disponibles en todas las Unidades o lo están en número insuficiente, lo que termina limitando su aplicación.
Los últimos modelos de ventiladores convencionales ofrecen modos de VNI específicos, que compensan automáticamente las fugas y disponen de sistemas de trigger más sensibles, por lo que la adaptación del paciente mejora considerablemente. Por ello, es posible que estos equipos sean una alternativa eficiente y fácilmente disponible para la aplicación de la VNI en la IRA pediátrica.
Aunque la VNI puede evitar la intubación, no es aceptable que su uso retrase la intubación cuando esta es necesaria. Por esto, es fundamental disponer de indicadores precoces de fracaso de la técnica.
Para tratar de dar respuesta a estos interrogantes, realizamos un estudio clínico prospectivo, no controlado, en 47 episodios de IRA moderada-grave de 37 niños (1 mes-16 años) ingresados en la UCIP del Hospital Clínico de Valencia desde Enero de 2004 hasta Junio del 2008. Se aplicó a los pacientes VNI mediante un ventilador volumétrico convencional con módulo de VNI (Evita 2 Dura, Dräger).
La causa más frecuente de IRA fue neumonía (42.5%). El riesgo de mortalidad PELOD fue de 8.5%±20.4 % (rango, 0-84%). En 14 casos se utilizó inicialmente CPAP+PS, necesitando cambiar a BIPAP+PS en 7 y en 33 casos BIPAP+PS. Los parámetros de máxima asistencia fueron: PIP 19±2.7 cmH2O (15-25), PEEP 6±1.2 cmH2O (4-9), PS 10.6±2.5 cmH2O (5-18), FiO2 0.5±0.2 (0.3-1) y PM 102.2 cmH2O (6-15).
Se observó mejoría significativa en las primeras 2-4 horas del inicio de la VNI de: frecuencia respiratoria, frecuencia cardiaca, pH, pCO2 y SatO2. También se alcanzó una mejoría progresiva del score clínico en las primeras 6 horas. La duración de la VNI fue 72.3 ± 60.1 horas (2-216 h). Las complicaciones fueron menores y relacionadas con la interfase y el tiempo de VNI. En nueve pacientes (19.1%) la técnica fracasó y los pacientes precisaron intubación, entre las 3 y 87 horas (33.6±29.6 horas). El fracaso se asoció con menor edad de los pacientes, diagnóstico de SDRA, y empeoramiento de la Rx de tórax a las 24 y/o 48-72 horas. En el grupo de éxito se observó una reducción significativa en la frecuencia cardiaca y en la pCO2 entre las 2-4 horas del inicio de la VNI. La asistencia respiratoria fue mayor en el grupo de fracaso, tanto la asistencia inicial como máxima. En el análisis multivariante, sólo la
presión media (PM) y la FiO2 formaron parte de la función discriminante éxito/fracaso con un punto de corte de 11.5 cmH2O y 0.57 respectivamente.
En conclusión, creemos que la VNI aplicada con este equipo es una alternativa eficiente en el tratamiento de la IRA pediátrica. Además, ofrece parámetros, como la PM, que pueden actuar como predictores de éxito/fracaso. La valoración conjunta de la PM y la FiO2 pueden actuar, en cualquier momento de la evolución de la IRA, como indicadores directos de fracaso de la VNI.; Non-invasive ventilation (NIV) constitutes an alternative in the treatment of pediatric Acute Respiratory Failure (ARF). However it shouldn't delay endotraqueal intubation (ETI) when it's necessary. A major objection to NIV in pediatric ARF arises when selecting the right device to apply it.
The aim of this study is to evaluate the feasibility and outcome of NIV by volumetric ventilator with specific NIV and to identify success and failure prognostic signs of NIV in pediatric ARF.
We performed a prospective non controled clinical study in children, aged 1 month to 16 years, with moderate to severe ARF who received NIV through the use of an Evita 2 Dura fitted with an NIV module (Dräger), in a period of 4-yr time.
We apply NIV to 37 episodes of ARF in 47 patients. Pneumonia was the most frequent diagnosis. PELOD mortality risk was 8.5%±20.4 % (range, 0-84%). Initially, BIPAP+PS was applied in 33 cases and CPAP+PS in 14. The highest parameters set were: PIP 19±2.7 cmH2O (15-25); PEEP 6±1.2 cmH2O (4-9), PS 10.6±2.5 cmH2O (5-18), FiO2 0.5±0.2 (0.3-1) and MAP 102.2 cmH2O (6-15). Significant improvement was observed within the first 2-4 hours of NIV for: respiratory rate, heart rate, pH, pCO2, and arterial oxygen saturation. There was a progressive clinical score improvement in the first 6 hours. The duration of NIV was 72.3 ± 60.1 hours (2-216 h). Complications were minor, related to the time of NIV. Nine cases (19.1%) needed ETI (33.6±29.6 hours). Failure was associated with the youngest age group (4±3.3 vs 7.7±5 years, p < 0.04), ARDS (failure/ARDS: 5/10 vs failure/non ARDS: 4/37, p=0.013) and worsening radiographic images taken at 24 and/or 48-72h (p=0.001 and p<0.001 respectively). A significant reduction in heart rate was observed between the 2nd and 4th hours after the start of NIV and pCO2 only in the success group. Breathing assistance was higher in the failure group, both initial and maximum assistance. In the multi-variant analysis only maximum mean pressure (MAP) and FiO2 formed part of the discriminant success/failure function with a cut-off point of 11.5 cmH2O and 0.57 respectively.

Regulación de la biogénesis mitocondrial y de la biogénesis ribosomal en la cirrosis biliar secundaria en ratas.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:16 GMT

Regulación de la biogénesis mitocondrial y de la biogénesis ribosomal en la cirrosis biliar secundaria en ratas. Arduini, Alessandro La acumulación de sales biliares hidrofóbicas en el hígado promueve el desarrollo de la cirrosis
biliar. Ésta patología está asociada con alteraciones de la función mitocondrial, promoción de
la fibrosis y remodelamiento del parénquima hepático. Objetivos: Estudiar la biogénesis
mitocondrial y la biogénesis ribosomal en el hígado cirrótico. Métodos: Se utilizó el modelo
experimental de cirrosis inducida por ligadura del ducto biliar común (BDL) en ratas.
Resultados y discusión: a) Estudio de la biogénesis mitocondrial. El hígado cirrótico muestra
una alteración de la regulación a nivel nuclear, con incremento de la fosforilación de NRF-1 y la
disminución de GABP-a. El coactivador PGC-1a, regulador positivo de la función de NRF-1 está
disminuido en el hígado cirrótico. TFAM, importante proteína implicada en el mantenimiento y
trascripción del ADN mitocondrial está disminuida en el hígado cirrótico. Se propone una
alteración del mecanismo de import de proteínas hacia la mitocondria, ya que disminuyen los
niveles de TOMM70, que tiene función de receptor de membrana mitocondrial. Se observa
también una disminución de la chaperona mtHSP70 en la mitocondria. Sin embargo, VDAC,
proteína con localización membranaria está incrementada en extractos mitocondriales de
hígado BDL. Este resultado en coherente con el incremento de TOMM40, importante proteína
con función de canal de membrana, responsable del import de VDAC. Esta alteración en los
mecanismos de import son la probable causa del decremento del ADN mitocondrial en el
hígado cirrótico. b) Estudio de la biogénesis ribosomal. En el hígado cirrótico se observa un
incremento marcado de PCNA, marcador de proliferación, y de la cantidad de ADN. Los
mecanismos de señalización citosólica están activados en el hígado cirrótico. Un incremento en
los niveles de fosforilación de ERK1/2 están asociados con un incremento de la fosforilación de
c-MYC, regulador de la proliferación desde las tres polimerasas. Se observa también un mayor
nivel del ARNm y de proteína de UBF, factor de regulación de la trascripción desde la ARN-POL
I. En el hígado cirrótico se observa un incremento en los niveles de ARNm de varias proteínas
ribosomales (rplp0, rpl30, rpl32, rps16), además del ARNm de proteínas responsables del
procesamiento y transporte del ARN ribosomal. Conclusiones: a) La cirrosis biliar está asociada
con una disminución del ADN mitocondrial, debido a una marcada disminución de TFAM. Este
fenómeno está relacionado con una alteración de los niveles de las proteínas responsables del
import de proteínas hacia la mitocondria. b) La proliferación celular es activa en el hígado
cirrótico. La activación ERK1/2 y la fosforilación de c-MYC son señales implicadas en el
incremento de la biogénesis ribosomal. Este mecanismo incluye el incremento de los niveles
de ARNm de genes implicados en la síntesis de ribosomas.; BACKGROUND: Biliary cirrhosis is characterized by hydrophobic bile acids accumulation in the
liver. This is associated with mitochondrial electron transport chain dysfunction and increased
hydrogen peroxide production. Mitochondrial density (mitochondrial mass per gram of liver
tissue) decreases but no explanation has been put forward. Cirrhotic liver is also characterized
by hepatomegaly and regenerative nodules, sometimes considered as a pre-neoplastic lesion.
AIM: to study mitochondrial biogenesis and ribosome biogenesis in the rat liver with secondary
biliary cirrhosis. RESULTS AND DISCUSSION: In the cirrhotic liver there is an alteration of mRNA
and protein level of the master regulators of mitochondrial biogenesis. GABP-α and PGC-1-α
are decrease but NRF-1 is phosphorylated and found in nuclei of cirrhotic livers. TFAM, a
downstream target and regulator of mtDNA maintenance in decreased at protein level.
Surprisingly, the mature form of TFAM was absent from mitochondria of cirrhotic livers. We
observed an alteration of mitochondrial and cytosolic proteins that regulate mitochondrial
import. This can explain why mtHSP70, a matrix directed mitochondrial protein was also
absent from mitochondria. We also found that proliferative stimuli are active in the cirrhotic
liver. ERK1/2 and c-MYC were phosphorylated and CDK-4 was increased. Importantly, we
observed a complete degradation of pRB, a cell cycle regulator, in the cirrhotic liver. This was
mirrored by an overexpression of several genes encoding ribosomal proteins and rRNA
processing factors. All this findings support an increased DNA content in BDL liver.
CONCLUSIONS: Liver cirrhosis is characterized by a decreased liver mitochondrial density and
mtDNA/nDNA ratio. 1) A decreased mitochondrial TFAM content is the main responsible for
this phenotype. 2) Liver proliferation is active during cirrhosis. Proliferative stimuli promote
DNA replication and liver growth.

Variabilidad geográfica en la cirugía de la patología degenerativa del raquis en el Sistema Nacional de Salud

Tue, 12 Apr 2011 19:07:16 GMT

Variabilidad geográfica en la cirugía de la patología degenerativa del raquis en el Sistema Nacional de Salud Ruiz Jareño, Lourdes INTRODUCCIÓN
La cirugía de columna es un procedimiento reconocido en la literatura como de alta variabilidad geográfica. La variabilidad viene determinada, entre otros factores, por la incertidumbre sobre el manejo terapéutico de la patología degenerativa y por tanto las decisiones médicas pueden ser más sensibles a la oferta.
OBJETIVOS
Describir las variaciones en las tasas de cirugía vertebral de 156 áreas de salud. Comparar las tasas obtenidas en las personas mayores con las de la población asegurada por Medicare en Estados Unidos. Valorar si hay diferencias en las tasas quirúrgicas por el género. Analizar las asociaciones entre las tasas y los recursos sanitarios disponibles y diferentes variables socioeconómicas.
HIPÓTESIS
No se formulan hipótesis sobre el componente descriptivo. Se ha adoptado la hipótesis nula de no diferencias entre las tasas de intervenciones por áreas de salud, según el género y de no asociación entre las tasas y los recursos hospitalarios ni con variables sociodemográficas.
MATERIAL Y MÉTODOS
Estudio transversal, de las tasas estandarizadas por edad y sexo de las intervenciones de raquis realizadas en 2004 en las 15 Comunidades Autónomas (CCAA) participantes en el Proyecto Atlas de Variaciones en la Práctica Médica en el Sistema Nacional de Salud (excepto Castilla-León y Madrid).
La población incluye 34.796.246 de habitantes. Casos incluidos: códigos de procedimiento 81.0x (artrodesis vertebral), 80.5x (escisión del disco intervertebral) y 03.0x (descompresión de canal vertebral) de la CIE-9MC. Casos excluidos: diagnósticos asociados a patología tumoral, obstétrica, inflamatoria, infecciosa y traumática.
Para el análisis se utilizaron los estadísticos propios del Análisis de Áreas Pequeñas calculando las tasas de cirugía y su variabilidad y otros no específicos de variabilidad.
RESULTADOS
En el año 2004 y en las 156 áreas de las 15 Comunidades autónomas se realizaron unas 13759 intervenciones. Casi la mitad conllevaron una cirugía de fijación, el 44% fueron laminectomías- discectomías y menos del 10% se identificaron con los otros casos cirugía descompresiva.
Los coeficientes de variación sitúan a la artrodesis y a la cirugía discal en el rango de variabilidad moderada y de variabilidad baja al considerar el total de la cirugía.
En la población de 65 y más años, las laminectomías descienden a expensas de la cirugía de fijación y de la otra cirugía descompresiva, con una variabilidad en las tasas más elevada que para la población general. Al comparar las tasas de los mayores del SNS con las de Medicare, a pesar de su gran superioridad en términos absolutos, su variabilidad es menor.
La distribución de las tasas de cirugía de columna por género no presenta desigualdades constatables.
La asociación de las tasas de cirugía vertebral con las variables de la oferta de recursos, con los indicadores poblacionales y con las variables socioeconómicas fue en general discreta, con baja capacidad explicativa excepto para unas pocas variables.
Hay que asumir, entre otras limitaciones (codificación, información de la población) una posible variación aleatoria por la inestabilidad de los estadísticos.
CONCLUSIONES
Los resultados de este estudio han mostrado para las tasas de cirugía vertebral una variabilidad de moderada a baja, ser menores en los ancianos y con mayor variabilidad que en la población general, ser similares en hombres y mujeres, y no se han detectado asociaciones importantes de las tasas de cirugía entre la oferta ( excepto la tasa de médicos residentes), ni entre los factores demográficos ni los socioeconómicos ( a excepción del nivel de renta y del índice de actividades económicas en los mayores). En general, las tasas son menores que las de otros países como constata la literatura.; INTRODUCTION. Wide geographic variations in the spinal surgery have been recognized. Variability reflects, among other factors, uncertainty about the therapeutic management of spinal disorders.

OBJECTIVES. Describe geographic variations in rates of spinal surgery of 156 health areas. Compare the elderly rates with those of Medicare enrollees in the United States. Assess if there are differences in the surgical rates by gender. Analyze associations between the rates and the local resources and different socio-economic variables.

HYPOTHESIS. It has taken the null hypothesis no differences between the surgical rates by variables.

MATERIAL AND METHODS. Description of standardized rates of spinal procedures performed in 2004 in the 15 Autonomous Communities. The population includes 34.796.246 inhabitants with codes of procedure: 81.0x (arthrodesis), 80.5x (excision of the intervertebral disc) and 03.0x (decompression of spinal canal) of the ICD-9CM. Its excluded diagnoses associated with tumoral pathology, obstetric, inflammatory, infectious and traumatic. For the analysis rates were used the method of Small Area Analysis and other non-specific statisticians.
RESULTS. In 2004 and in the 156 areas were performed 13.759 interventions, 47 percent involved fusion, 43,63 percent were laminectomy- discectomy and 9,29 percent identified with the other decompressive surgery.
Arthrodesis and surgery disk fall in the range of moderate and low variability regarding overall surgery. In the elderly population, the laminectomy descend at the expense of the fusion surgery and the other decompression surgery, with higher variability than for the general population. The Medicare rates, despite its vast superiority in terms absolute, shows lower geographic variation.
The distribution of the rates of spinal surgery by gender does not present inequalities it. The association of the rates of spinal surgery with the supply variables, with the socio-economic variables was generally quiet, with low capacity explanatory except for a few variables.

CONCLUSIONS. The geographic variation for the rates of spinal surgery has shown moderate to low , be higher the elderly, be similar by gender, and have not been detected important partnerships in the rates of surgery between the offer, nor among the demographic and socioeconomic factors.

Efectes electrofisiològics miocàrdics intrínsecs sobre l'automatisme. La conducció i la refractarietat produïts per la realització d'un protocol d'entrenament. Estudi experimental.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:15 GMT

Efectes electrofisiològics miocàrdics intrínsecs sobre l'automatisme. La conducció i la refractarietat produïts per la realització d'un protocol d'entrenament. Estudi experimental. Pelechano Ribes, Francisca INTRODUCCIÓ
És conegut que la fibril·lació ventricular és la responsable de més del 70% de la
mort sobtada d'origen cardíac i que aquesta és una de les principals causes de mort en el
món occidental industrialitzat. Per tant, es interessant l'estudi dels factors que poden
modificar els mecanismes d'instauració, perpetuació i cessament d'aquesta arítmia.
En aquest sentit, diferents autors han estudiat l'efecte beneficiós de l'exercici físic.
Així, els resultats dels estudis realitzats en humans per Billman en 2002 indiquen
l'existència de l'efecte protector de l'entrenament aeròbic front a aquesta arítmia. A nivell
intrínsec, Such i col·laboradors realitzaren estudis experimentals sobre les modificacions
electrofisiològiques que es produeixen amb l'entrenament i que podrien contribuir en
aquest efecte beneficiós.
Per tant, els objectius foren investigar en cors aïllats de conill l'efecte de
l'entrenament sobre:
A) L'automatisme sinusal, la conducció auriculoventricular i la velocitat de conducció
ventricular.
B) La refractarietat auricular, ventricular i del sistema de conducció auriculoventricular i
ventriculoauricular.
C) La freqüència dominant de la fibril·lació ventricular induïda.
D) La longitud d'ona del procés d'activació.
Com a objectiu complementari es proposà la tipificació de l'esmentat entrenament.
MATERIAL I MÈTODES
L'estudi ha estat realitzat en cors aïllats de conills mascles, de raça Nova Zelanda,
que es dividiren en 2 grups, control (n=12) i entrenat (n=15). Els conills entrenats van ser
sotmesos a un protocol d'entrenament en cinta rodant durant 6 setmanes, més una
addicional de familiarització, el mateix temps que van romandre estabulats els conills del
grup control. El protocol d'entrenament va consistir en 30 sessions, és a dir, 5 dies a la
setmana durant les 6 setmanes. Cada sessió es va compondre de 6 sèries de carrera
contínua sobre tapís rodant, a 0,33 m/s, durant 4 minuts. L'interval de descans entre cada
una de les 6 sèries va ser d'1 minut.
El sistema de perfusió de Langendorff que permet l'arribada al cor de l'oxigen i els
nutrients necessaris a través de l'aorta ascendent. Es tracta d'una perfusió retrògrada cap
al sistema de vasos coronaris. El protocol experimental fou el següent:
A) Mesura de flux coronari.
B) Registre electrogràfic basal.
C)Test de l'extraestímul auricular amb diferents cicles d'estimulació: al 10% de la
freqüència basal, a 250 ms, a 200 ms i a 150 ms.
D) Registre electrogràfic.
E) Test de l'extraestímul ventricular amb cicles d'estimulació anteriorment citats.
F) Inducció de la fibril·lació ventricular amb freqüències creixents.
G) Mesura del pes dels cors.
CONCLUSIONS
Les conclusions que es poden extraure són que l'entrenament en aquest model
experimental:
1) Disminueix el cronotropisme sinusal i la conducció auriculoventricular i no modifica la
velocitat de conducció ventricular.
2) Augmenta la refractarietat ventricular i la del sistema de conducció auriculoventricular,
mentre que no modifica la refractarietat auricular, ni la refractarietat del sistema de
conducció ventriculoauricular.
3) Disminueix la freqüència dominant mitjana de la fibril·lació ventricular induïda encara
que no modifica la freqüència dominant màxima ni la freqüència dominant mínima de la
fibril·lació ventricular induïda.
4) Augmenta la longitud d'ona del procés d'activació ventricular.
5) Les dades de laboratori obtingudes són indicatives que el protocol d'entrenament
utilitzat ha estat efectiu en el desenvolupament de modificacions tant electrofisiològiques
com bioquímiques i a més, aquest entrenament s'ha desenvolupat en condicions
aeròbiques.
6) Com a conclusió final, es planteja la possibilitat que l'entrenament aeròbic produïsca
efectes beneficiosos, a través de la modificació d'algunes propietats electrofisiològiques
de caràcter intrínsec, per tant, no dependents de factors nerviosos extrínsecs i/o
humorals, que probablement dificulten la instauració d'arítmies per reentrada. El present
treball apunta cap a una possible ferramenta terapèutica no farmacològica i de prevenció
de patologia miocàrdica, i planteja la necessitat de prosseguir amb aquestes
investigacions.; Aim: To study the intrinsic electrophysiological myocardium modifications produced by
chronic exercise in isolated rabbit heart.
Methods: Two groups of New Zealand rabbits were studied. One group of rabbits
(trained group, n=15) was trained on a motor-driven treadmill following a protocol
(running velocity 0.33 m·s-1) and another group of rabbits (control group, n=12) was
housed in the animal quarters for the same number of days as the training protocol
duration. The electrophysiological parameters investigated in an isolated perfused
rabbit heart were: a) basic sinus cycle length, atrioventricular conduction and
ventricular conduction velocity; b) atrial, ventricular, atrioventricular and ventriculoatrial
effective and functional refractory periods were obtained using the extrastimulus
technique at four different pacing cycle lengths; c) mean, maximum, and minimum
dominant frequencies of the induced ventricular fibrillation were also investigated using
a spectral method; d) wave length. In vivo heart rate, myocardial heat shock proteins
(HSP60), inducible nitric oxide synthetase (iNOS) and lactate concentration were also
determined as electrophysiological and biochemical markers of training.
Results: The following parameters were larger (p< 0.05) in trained group vs control
group: atrioventricular conduction, wave length, atrioventricular functional refractory
periods, ventricle effective and functional refractory periods, basic sinus cycle length,
HSP60 and iNOS expression values. The mean dominant frequency of the ventricular
fibrillation was lesser in trained group than control group and the rest of parameters did
not change.
Conclusion: Training seems to increase the electrical stability of ventricular
myocardium. As the electrophysiological modifications were exhibited in hearts not
submitted to extrinsic nervous system or humoral influences, they are, at least in part,
intrinsic modifications. These electrophysiological data also suggest that aerobic
training could protect against reentrant ventricular arrhythmias.

Mecanismo de depleción de glutatión y papel de la serín/treonín fosfatasa PP2A en la pancreatitis aguda.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:15 GMT

Mecanismo de depleción de glutatión y papel de la serín/treonín fosfatasa PP2A en la pancreatitis aguda. Escobar Cubiella, Javier En la presente Tesis Doctoral se han estudiado los mecanismos implicados en la degradación de glutatión reducido (GSH) en los modelos in vivo de pancreatitis aguda (PA) necrótica inducida por infusión retrógrada de taurocolato sódico al 3,5% y de PA edematosa inducida por una dosis supramáxima de ceruleína. Se ha confirmado que en la PA necrótica se produce la depleción mantenida de GSH. El mecanismo de síntesis de la glutamato citeína ligasa (GCL), mediado por ERK 1/2 y el factor de transcripción C-MYC, aparece activado tanto en la PA edematosa como en la necrótica, sin embargo en la necrótica se produce un fallo del mecanismo originado por la activación de la ribonucleasa (RNasa) pancreática en el citosol de las células acinares responsable de la degradación del ARNm de la GCL.
Además se ha profundizado en el mecanismo implicado en la degradación de GSH en las etapas tempranas de la PA, caracterizando la tasa de degradación de GSH y de formación de glutamato y cisteína en extractos citosólicos de páncreas de rata con PA necrótica. La degradación de GSH y la formación de cisteína y glutamato son prevenidas en presencia del inhibidor de serín peptidasas amino etil bencenil sulfonil fluoruro (AEBSF). También se ha realizado cromatografía de afinidad con columnas de retención de GSH (1) y de AEBSF-biotinilado (2) en extractos citosólicos de áncreas de ratas con PA necrótica identificando proteínas GSH transferasas (1) y Glutarredoxina (1) o Htra 3ª (2), RNasa pancreática (2), Tripsina (2), ARID 4D (Rbpl 1) (2) y Arginina: glicina amidino transferasa (2) como posibles enzimas implicadas en la degradación de GSH. Por otro lado, se han descartado la Tripsina, gamma-Glutamil transpeptidasa y Carboxipeptidasa B pancreática como posibles responsables de la hidrólisis del GSH.
En cuanto a la cascada inflamatoria, se ha determinado que durante la PA se produce la disminución de las serín treonín fosfatasas PP2A, PP2B (calcineurina) y PP2C, 1 hora después de la inducción de la PA necrótica y de las tirosín fosfatasas citosólicas que podría favorecer el aumento de la fosforilación de las MAPK en la PA.
En estudios in vitro, se ha estudiado la actividad de la PP2A en células AR42J incubadas con taurocolato al 0,3%. El taurocolato produce una disminución transitoria de la actividad PP2A indicando la implicación de la misma en fenómenos de señalización celular. Además la PTX es capaz de prevenir esa perdida de la actividad PP2A mediado por el AMPc.
Por inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) se ha comprobado que durante la PA se produce el reclutamiento de acetiltransferasas a los promotores de genes inflamatorios como egr-1, Inos-2, Icam-1 y TNF-alpha y que la PTX es capaz de bloquear la unión de las acetiltransferasas CBP y PCAF a dichos promotores. Además en algunos casosla PTX también promueve la unión del complejo deacetilasa mSIN3A/HDCA 1 a los promotores.; It has been studied the mechanisms involved in the degradation of GSH in vivo, using the model of necrotic acute pancretitis (AP) induced by infusion of sodium taurocholate (3,5%) and the model of aedematous AP induced by a supramaximal dose of caerulein, confirming that sustained depletion of GSH favours the development of necrotic AP. Despite the induction of glutamate citeine ligase (GCL) synthesis, mediated by ERK 1/2/C-MYC pathway in both models, in the necrotic AP the mechanism fails due to the activation of the ribonuclease (RNase) in the cytosol of pancreatic cells, which could be responsible for the mRNA degradation of the GCL.
Furthermore, it has been characterized the rates of GSH depletion and glutamate and cysteine formation in cytosolic extracts of rat pancreas and the inhibition of these rates by the serine peptidases inhibitor bencenil amino ethyl sulfonyl fluoride (AEBSF) in the model of necrotic AP. It has also been carried out affinity chromatography for purification of GSH (1) and AEBSF-biotinylated (2) binding proteins from pancreatic cytosol of rats with necrotic AP, identifying proteins such as GSH transferases Glutaredoxin (1) or Htra 3A, pancreatic RNase, trypsin, ARID 4D and arginine: glycine Amidine transferase (2).
Trypsin, Gamma-Glutamyl transpeptidase and pancreatic Carboxipeptide B, has been discarded as potential direct effector of the GSH depletion.
As for the inflammatory cascade, it has been found the loss of activity of the serine threonine phosphatases PP2A, calcineurin and PP2C and of cytosolic tyrosine phosphatases during AP, wihch could favour the increased phosphorylation of the MAPK in the AP.
In vitro, it has been studied the activity of PP2A in AR42J cells incubated with taurocholate 0.3%, which produced a transient decrease in the activity indicating the involvement of PP2A in cellular signaling events. Furthermore, the PTX is able to prevent the loss of PP2A activity mediated by cAMP.
By chromatin immunoprecipitation (ChIP) it has been also demonstrated the recruitment of acetyltransferase to the promoters of inflammatory genes such as egr-1, inos-2 and tnf-alpha during AP and its prevention by PTX treatment, which in some cases also promoted the mSIN3A/HDCA-1 deacetylase complex binding to their promoters.

Influencia del ejercicio físico intenso y prolongado sobre los principales parámetros bioquímicos relacionados con la nefrolitiasis.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:14 GMT

Influencia del ejercicio físico intenso y prolongado sobre los principales parámetros bioquímicos relacionados con la nefrolitiasis. Arasa Gil, Manuel El ejercicio físico intenso y prolongado es uno de los principales factores de estrés físico a
los que puede verse sometido el organismo, siendo por ello causa de importantes alteraciones de la
homeostasis. En tales circunstancias, los diferentes aparatos y sistemas del organismo sufren las
pertinentes modificaciones funcionales con el fin de mantener la constancia del medio interno. El
riñón, ante los cambios producidos responde con la formación de un orina por lo general escasa,
concentrada, ácida, y con una composición de solutos y un sedimento urinarios bastante diferentes a
los encontrados en condiciones de reposo. La cuestión es si una orina con estas características
favorece el proceso de la litogénesis y a la vez, si este proceso está o no aumentado durante las horas
y días siguientes a la finalización del ejercicio físico.
El presente estudio ha sido realizado sobre una muestra total de 35 sujetos varones, todos
ellos deportistas entrenados, sin antecedentes clínicos personales o familiares de nefrolitiasis y que
no presentan antecedentes clínicos personales de insuficiencia renal crónica y/o enfermedades
metabólicas relacionadas directa o indirectamente con la nefrolitiasis. A cada uno de ellos se les ha
realizado una prueba de esfuerzo con análisis de gases expirados para obtener sus umbrales
anaeróbicos (VT2). A su vez, a partir de los datos personales y antropométricos, se les ha instaurado
una dieta personalizada, normocalórica y con igual distribución de nutrientes para todos ellos. Cada
sujeto ha seguido la dieta como mínimo desde 4 días antes hasta 4 días después de la realización de la
prueba de campo, siendo libre en todo momento la ingesta de agua.
Dichos sujetos han realizado un ejercicio físico de larga duración (90 minutos), a una
intensidad correspondiente con el VT2 de cada uno de ellos y durante el cual sólo han ingerido agua
corriente "ad libitum". Antes y después del ejercicio han sido pesados y se han obtenido muestras de
sangre venosa para la determinación de: calcio, fosfato, ácido úrico, citrato, magnesio, zinc, urea,
creatinina, sodio, potasio y cloro y de orina para la determinación de: pH, densidad, oxalato, calcio,
fosfato, ácido úrico, citrato, magnesio, zinc, creatinina, sodio, potasio y cloro. Asimismo, durante los
cuatro días siguientes a su finalización se les ha tomado muestras de orina y datos de su peso corporal
a las 8 horas y a las 20 horas y también durante los primeros dos días post-esfuerzo se les ha tomado
muestra de sangre venosa a las mismas horas para analizar los parámetros expuestos anteriormente.
Para la valoración del riesgo litógeno hemos considerado si el valor de las concentraciones
de los parámetros medidos y de los INRILI estaban dentro o fuera del rango de normalidad, si se
cumplían los criterios de Conte y cols (1999), y/o el valor del criterio escalar.
Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que durante el ejercicio físico de alta
intensidad y larga duración, y con un grado de deshidratación no superior al 1,6% del peso corporal,
no hay un aumento del riesgo litógeno ni de la cristaluria, tanto de forma inmediata como en los
cuatro días siguientes a su realización. También parece haber un cierto margen de deshidratación, no
superior a ese 1,6%, durante el cual las concentraciones séricas de los parámetros analizados en
nuestro estudio se mantienen dentro del rango de normalidad. A la vez, los cambios inducidos sobre
las concentraciones urinarias de cualquiera de los parámetros de estudio, ya han revertido a las 24
horas después de la finalización del ejercicio.; Long term intense physical exercise is one of the principle factors of physical stress to which
our body can be subjected, causing important alterations of homeostasis. Under such
circumstances the kidneys respond with changes in the formation of urine which have
traditionally been connected with the appearance of kidney calculus. The question is whether
urine with these characteristics favours the process of lithogenesis and also if this process
increases during the hours or days that follow the cessation of the physical exercise.
The present study was carried out on a total of 35 healthy male volunteers. Each one of them
was subjected to a stress test including an analysis of exhaled gases in order to obtain their
anaerobic thresholds (VT2). They were also given a personalised normocaloric diet with an
equal distribution of nutrients for each one of them.
These individuals performed physical exercise over an extended period (90 minutes), at a
rate of intensity in accordance with their personal VT2, during which they drank plain water "ad
libitum". They were weighed both before and after the exercise and venous blood samples were
taken in order to measure the following: calcium, phosphates, uric acid, citrate, magnesium,
zinc, urea, creatinine, sodium, potassium and chlorine. In addition to this, during the two (1)
and four (2) days following the exercise, samples of (1) venous blood and (2) urine were taken
from each person, together with details of their body weight, at 08.00 hours and at 20:00 hours.
The results which were obtained from this experiment suggest that during intense exercise
over an extended period and with a degree of dehydration not above 1.6% of the body weight,
an increased risk of lithogenesis or of crystalluria does not exist immediately after the exercise
nor in the four subsequent days.

Efectos anticancerosos de polifenoles naturales: Peterostilbeno y quercetina.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:14 GMT

Efectos anticancerosos de polifenoles naturales: Peterostilbeno y quercetina. Ferrer Pastor, Paula La inhibición del crecimiento tumoral sobre el melanoma B16-F10, trans-resveratrol (t-
RESV), un estilbeno natural, está limitada por su baja biodisponibilidad (Asensi y cols.,
2002). La biodispoponibilidad de cualquier sustancia depende entre otros factores, de su
estructura química. El t-RESV en su estructura química posee tres grupos hidroxilo,
susceptibles de sufrir reacciones de conjugación y por tanto, de sufrir una rápida eliminación.
Modificamos su estructura química para aumentar su concentración plasmática a lo largo del
tiempo. Ello se ha de realizar teniendo en cuenta que el grupo hidroxilo en posición 4' y su
configuración trans son condiciones indispensables para ejercer sus actividades en
concreto, la actividad anticancerosa. Por tanto, nos quedan dos grupos hidroxilo en posición
3 y 5 que cambiamos por grupos metoxilo pudiendo disminuir así el grado de metabolización
hepática. Con estas modificaciones llegamos hasta una estructura polifenólica que coincide
con un estilbeno natural, el trans-pterostilbeno (t-PTER). Este compuesto presentaba
actividad anticancerosa y antidiabética entre otras.
La quercetina (QUER) es un flavonoide que se introdujo en nuestros ensayos porque podía
aumentar la biodisponibilidad de t-PTER ya que se había demostrado que competía con el t-
RESV por el metabolismo hepático y porque podía ejercer una sinergia antitumoral, ya que
presentaba propiedades anticancerosas.
Sintetizamos en el laboratorio, el t-PTER y realizamos los ensayos oportunos junto con la
QUER.
Primero se realizaron estudios de biodisponibilidad. Las concentraciones plasmáticas de
ambos polifenoles tras la administración de 20mg de t-PTER y QUER /kg de peso de ratón
vía oral fueron bajas, lo que no ocurrió tras la administración i.v., con las que obtuvimos las
concentraciones plasmáticas medias de los obtenidas tras su administración. Estas fueron
40 y 20 uM para el t-PTER y la QUER, respectivamente. Concentraciones que se utilizaron
en los ensayos in vitro aplicados durante una hora, cada día. Además la semivida biológica
del t-PTER fue 78 min muy superior de la del t-RESV (14 min).
En segundo lugar, se estudió la actividad antitumoral de estos polifenoles a concentraciones
biodisponibles. Tras los ensayos de actividad antitumoral in vitro e in vivo, se demostró que
el t-PTER actuaba impidiendo la adhesión de las células tumorales (B16M-F10) al endotelio
sinusoidal hepático (HSE) por inhibición de la expresión de VCAM-1 en el endotelio. El t-
PTER y la QUER principalmente, actuaban aumentando la toxicidad de las células B16MF10
adheridas por aumento de la expresión de genes proapoptóticos (BAX, BAD, BAK y
BID) y disminución de la expresión de genes antiapoptóticos (bcl-2, bcl-xL, bcl-w). Ambos
disminuyeron la metástasis tumoral in vivo en un 73% y duplicaron los días de supervivencia
de los animales enfermos. Tratando a los ratones con 20mg de t-PTER y QUER/ kg de peso,
por vía i.v cada día.
En tercer lugar, estudiamos el mecanismo por el cual, ambos polifenoles aumentaban la
citotoxicidad de las células tumorales. Para ello, nos centramos en la producción de óxido
nítrico (NO) por parte de las B16M-F10 y el HSE (durante su interacción con las células
tumorales). Comprobamos que t-PTER y QUER, actuaban sobre las células tumorales, en
situación previa a su interacción con el endotelio, inhibiendo la expresión de iNOS,
reduciendo el nivel de NO por la células tumorales, ello provocó la disminución de la
expresión del gen bcl-2 vía inhibición de la fosforilación de el factor de transcripción CREB
conduciendo de esta manera a la apoptosis celular. Por otro lado, t-PTER y QUER, actúan
durante la interacción de las células B16M-F10 al HSE, aumentando la expresión de eNOS,
de esta forma el endotelio produce más NO que provoca un daño celular directo y la
apoptosis de la célula tumoral vía activación de la esfingomielinasa neutra dependiente de
Mg y aumento de ceramida.; Intravenous administration to mice of trans-pterostilbene (t-PTER; 3,5-
dimethoxy-4-hydroxystilbene) and quercetin (QUER; 3,3,4,5,6-
pentahydroxyflavone), two structurally related and naturally occurring small
polyphenols decreases the adhesion of highly malignant B16 melanoma F10
(B16M-F10) cells to vascular endothelium and inhibits metastatic growth
inhibiting bcl-2 expression in metastatic cells, which sensitizes them to vascular
endothelium-induced cytotoxicity. The molecular mechanism linking polyphenol
signaling and bcl-2 expression is known. NO is a potential bioregulator of
apoptosis with controversial effects on Bcl-2 regulation. Polyphenols may affect
NO generation. Short-term exposure (60 min/day) to t-PTER (40 µM) and
QUER (20 µM) (approximate mean values of the plasma concentrations
measured within the first hour after intravenous administration of 20mg of each
polyphenol/kg) down-regulated inducible NO synthetase in B16M-F10 cells and
up-regulated endothelial NO synthetase in the vascular endothelium and
thereby facilitated endothelium-induced tumor cytotoxicity. Very low and high
NO levels down-regulated bcl-2 expression in B16M-F10 cells. t-PTER and
QUER induced a NO shortage-dependent decrease in cAMP-response
element-binding protein phosphorylation, a positive regulator of bcl-2
expression, in B16M-F10 cells. On the other hand, during cancer and
endothelial cell interaction, t-PTER- and QUER-induced NO release from the
vascular endothelium up-regulated neutral sphingomyelinase activity and
ceramide generation in B16MF10 cells. Direct NO-induced cytotoxicity and
ceramide-induced mitochondrial permeability transition and apoptosis activation
can explain the increased endothelium-induced death of Bcl-2-depleted B16MF10
cells.

Efectos del ejercicio físico crónico sobre la excitabilidad intrínseca miocárdica. Estudio experimental

Tue, 12 Apr 2011 19:07:13 GMT

Efectos del ejercicio físico crónico sobre la excitabilidad intrínseca miocárdica. Estudio experimental López Bueno, Laura Introducci¨®n: Dada la escasa informaci¨®n acerca de los efectos del ejercicio f¨ªsico cr¨®nico sobre los
par¨¢metros que determinan la longitud de onda del proceso de activaci¨®n mioc¨¢rdico ventricular y de la
frecuencia dominante de la fibrilaci¨®n ventricular (FV) inducida, y la importancia que estos par¨¢metros tienen
a nivel de protecci¨®n mioc¨¢rdica sobre la aparici¨®n de arritmias por reentrada, y sobre la estabilizaci¨®n de las
mismas, nos ha parecido de inter¨¦s investigar en conejos sometidos a un protocolo de ejercicio f¨ªsico cr¨®nico,
los efectos del mismo sobre los siguientes par¨¢metros: 1) la conducci¨®n ventricular intr¨ªnseca; 2) la
refractariedad intr¨ªnseca auricular, ventricular, del sistema de conducci¨®n auriculoventricular y
ventriculoauricular; 3) la longitud de onda del proceso de activaci¨®n mioc¨¢rdica; 4) la frecuencia de la FV
inducida y sin interrumpir la perfusi¨®n. Por otra parte, dados los efectos del ejercicio f¨ªsico cr¨®nico sobre el
automatismo intr¨ªnseco y sobre la conducci¨®n AV intr¨ªnseca, hipotetizamos que el ejercicio f¨ªsico cr¨®nico
aumenta la refractariedad intr¨ªnseca auricular, ventricular, del sistema de conducci¨®n auriculoventricular y
ventriculoauricular y la longitud de onda del proceso de activaci¨®n mioc¨¢rdica, y disminuye la frecuencia de
la FV.
M¨¦todos: 12 conejos fueron sometidos a un programa de entrenamiento (GE) durante 6 semanas y 11 conejos
permanecieron estabulados el mismo tiempo (GC). Finalizado el periodo de entrenamiento y/o estabulaci¨®n,
se aislaron los corazones y se conectaron a un sistema de Langendorff. Se situaron electrodos de estimulaci¨®n
y registro en aur¨ªcula izquierda y en ventr¨ªculo izquierdo. Se determin¨®: el periodo refractario efectivo
auricular (PREA) y el periodo refractario funcional auricular (PRFA); el periodo refractario efectivo y
funcional del sistema de conducci¨®n auriculoventricular (PRESCAV y PRFSCAV, respectivamente); el
periodo refractario efectivo ventricular (PREV) y funcional ventricular (PRFV) y el periodo refractario
efectivo y funcional del sistema de conducci¨®n ventriculoauricular (PRESCVA y PRFSCVA,
respectivamente); la velocidad de conducci¨®n (VC); la longitud de onda (LO) y la frecuencia dominante (FD)
media, m¨¢xima y m¨ªnima de la FV.
Resultados: Los intervalos V-V in vivo e in vitro fueron mayores en el GE que en el GC (p¡Ü0.05). En cuanto a
la refractariedad auricular, no hubo diferencias estad¨ªsticamente significativas entre los animales de ambos
grupos. Tampoco encontramos diferencias entre los periodos refractarios funcionales del SCAV. Los
PRESCAV no se pudieron determinar, debido al escaso n¨²mero de valores hallados ya que durante la
realizaci¨®n del test del extraest¨ªmulo auricular, se alcanz¨® antes el PREA. Tampoco se pudo realizar la
estad¨ªstica respecto al PRESCVA y PRFSCVA. En referencia a los valores del PREV, no hubo diferencias
estad¨ªsticamente significativas entre los grupos. En cuanto a los PRFV, fueron mayores en el GE que en el
GC (p¡Ü0.05), al estimular con los trenes: un 10% menor que la longitud del ciclo sinusal b¨¢sico, 250 ms, 200
ms y 150 ms. En cuanto a la VC, no hubo diferencias. Respecto a los valores de la LO, no encontramos
diferencias entre GE y GC, aunque la p fue igual a 0.06. Respecto a la FD durante la FV, fue menor la FD
m¨¢xima en el GE. No encontramos diferencias entre grupos en la FD media y m¨ªnima.
Conclusiones: El ejercicio f¨ªsico cr¨®nico: 1. Alarga la refractariedad ventricular. 2. La modificaci¨®n de la
refractariedad ventricular es de car¨¢cter intr¨ªnseco. 3. Se ha observado una tendencia al aumento de la
longitud de onda del proceso de activaci¨®n mioc¨¢rdica ventricular. 4. Planteamos la posibilidad que el
ejercicio f¨ªsico regular exhiba efectos protectores contra la instauraci¨®n de arritmias re-entrantes. 5.
Contribuimos a asentar el principio de que el entrenamiento f¨ªsico produce una depresi¨®n del automatismo
sinusal intr¨ªnseco.; Introduction: We investigated in trained rabbits, the effects of the physical exercise on: 1) the
intrinsic ventricular conduction; 2) the intrinsic auricular refractoriness, intrinsic ventricular
refractoriness, the auricle-ventricular and the ventricle- auricular systems of conduction; 3) the
wavelength of the myocardial activation process; 4) the frequency of the VF.
Methods: 12 rabbits (TG) were submitted to a training program and 11 rabbits were not trained
(CG). On having finished the period of training and/or stabling, their hearts were isolated and
connected to a Langendorff system. The following parameters were recorded: the auricular
effective refractory period (AERP) and the auricular refractory functional period (AFRP); the
auricle-ventricular system of conduction¡¯s effective and functional refractory period
(AVSCERP) and AVSCFRP, respectively); the ventricular effective refractory period (VERP)
and functional ventricular (VFRP) and the ventricle-auricular system of conduction¡¯s effective
and functional refractory period (VASCERP and VASCFRP, respectively); the speed of
conduction (SC); the wavelength (WL) and the dominant frequency (DF) average, maximum
and minimal of the VF.
Results: V-V intervals in live and in vitro were major in the TG than in the CG (p¡Ü0.05).
In relation to the auricular refractoriness, there were no differences. We neither found
differences between the refractory functional periods of the AVS. In reference to the AERP,
there were no differences. As for the VFRP, they were major in the TG than in the CG (p¡Ü0.05),
on having stimulated the trains: 10 % minor that the length of the sinusal basic cycle, 250 ms,
200 ms and 150 ms. As for the SC and WL, there were no differences. With regard to the FD
during the FV, the maximum DF was minor in the TG.
Conclusions: The physical chronic exercise: 1.It prolongs the ventricular refractoriness. 2. The
modification of the ventricular refractoriness is of intrinsic character. 3. We can raise the
possibility that the physical regular exercise exhibits protective effects against the establishment
of re-entry arrhythmias. 5. We contribute to consolidate the principle of which the physical
training produces a depression of the intrinsic sinusal automatism.

Efecto del estradiol y otros compuestos estrogénicos sobre la expresión de genes asociados a la longevidad.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:13 GMT

Efecto del estradiol y otros compuestos estrogénicos sobre la expresión de genes asociados a la longevidad. Gambini Buchón, Juan Todos los seres vivos como condición natural tienen un instinto de supervivencia que les obliga a preservar la especie. Ya desde que el hombre es consciente de su evolución ha intentado prolongar su vida e incluso inmortalizarla. Una vez desechado el sueño de la inmortalidad, el hombre se ha centrado en el objetivo de incrementar su supervivencia con mejores condiciones físicas y mentales. Los hábitos saludables, la adecuada nutrición, la higiene, el diagnóstico precoz de enfermedades y el avance en los tratamientos de enfermedades, han logrado en los últimos 100 años, duplicar la expectativa de vida de la especie. De este modo la longevidad o supervivencia de la especie humana ha conseguido una mejora espectacular en la vida media aunque no en la vida máxima, La supervivencia es un parámetro específico de cada especie, en el que claramente existe una implicación genética que explicaría las diferentes tasas de supervivencia entre las especies. La longevidad de las especies viene determinada por su longevidad media y máxima. La longevidad máxima corresponde a la edad del individuo más longevo de la especie y la media corresponde a un dato estadístico en el cual el 50 % de la población sigue aún viva. Existen factores intrínsecos y extrínsecos que pueden afectar a las diferentes longevidades entre individuos. De este modo los factores extrínsecos afectarían principalmente a la vida media, por ejemplo un hábito de vida saludable está correlacionado con una mayor probabilidad de supervivencia. Existen numerosos datos estadísticos que muestran diferencias de longevidades entre países, hecho que se puede atribuir a los diferentes hábitos de vida. Respecto a la vida máxima de las especies, son los factores intrínsecos los que mas implicados están, de modo que el material genético es el que determinaría las diferentes longevidades (figura 5.2). En los estudios de modificaciones genéticas relacionadas con la longevidad, cabe destacar la creación de una mosca transgénica que sobreexpresa dos enzimas antioxidantes, la catalasa y la superóxido dismutasa (Orr and Sohal, 1994). Estas moscas presentan un incremento tanto en la vida media como en la máxima respecto de sus controles, este hecho demuestra en parte la teoría del estrés oxidativo y la longevidad, ya que individuos que presentan una mayor defensa frente al estrés oxidativo son significativamente más longevos. Además a lo largo de estos años se han identificado en Drosophila otros genes que al ser sobreexpresados o silenciados modifican la longevidad de la especie.
Esta tesis trata de mostrar como podemos modificar genes que están directamente relacionados con la longevidad, simplemente cambiando nuestros hábitos alimenticios. De este modo, podemos cuidar nuestro envejecimiento comiendo sano hoy para encontrarnos mejor mañana.; Females live longer than males in many mammalian species, including humans. This natural phenomenon can be explained on the basis of the mitochondrial theory of aging. Mitochondria are a major source of free radicals in cells. Mitochondria from female rats generate half the amount of hydrogen peroxide than those of males and have higher levels of mitochondrial reduced glutathione. The latter is due to females behaving as double transgenic in over-expressing antioxidant enzymes. Estrogens bind to the estrogen receptors and subsequently activate the mitogen activated protein (MAP) kinase and nuclear factor kappa B (NFkappaB) signalling pathways, resulting in an up-regulation of antioxidant enzymes. Moreover, the 16S rRNA expression, which decreases significantly with aging, is four times higher in mitochondria from females than in those from males of the same chronological age. On the contrary, the oxidative damage of mitochondrial DNA is fourfold higher in males than in females. Ovariectomy abolishes the gender differences between males and females and estrogen replacement rescues the effect of ovariectomy. The challenge for the future is to find molecules that have the beneficial effects of estradiol, but without its feminizing effects. Phytoestrogens or phytoestrogen-related molecules may be good candidates to meet this
challenge.

Depleción de GSH y Bcl-2 en células de melanoma maligno B16: mecanismos de sensibilización frente al estrés oxidativo/nitrosativo y la quimioterapia.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:12 GMT

Depleción de GSH y Bcl-2 en células de melanoma maligno B16: mecanismos de sensibilización frente al estrés oxidativo/nitrosativo y la quimioterapia. Benlloch García, María Introducción:
La causa de muerte de la mayoría de los enfermos de cáncer es la metástasis de células tumorales.
El melanoma es un modelo muy utilizado para el estudio de la progresión del tumor. La supervivencia y crecimiento de células de MB16 metastáticas está directamente relacionado con el aumento de su contenido en glutatión (GSH). Además dichas células sobreexpresan Bcl-2, mostrando un incremento de GSH sin mostrar un aumento en su síntesis pero sí una disminución en la salida de GSH. Otro punto importante es el GSH mitocondrial (mtGSH), ya que la mitocondria no puede sintetizar GSH. Se ha visto que la depleción de mtGSH facilita la liberación de señales moleculares implicadas en la apoptosis. En trabajos previos de nuestro grupo se demostró en células de tumor ascítico de Ehrlich que L-glutamato (L-Glu) derivado de L-Gln competía con el GSH inhibiendo su transporte al interior de la mitocondria.

Objetivos
Estudiar los mecanismos de salida de GSH de la célula tumoral para potenciarlos.
Disminuir los niveles de mtGSH mediante la utilización de una dieta enriquecida en glutamina (GED).
Utilizar dichos mecanismos de depleción de GSH junto con la disminución de la expresión de Bcl-2 para sensibilizar las células tumorales al estrés oxidativo que genera el endotelio y a una posible quimioterapia.

Resultados
Vimos que la liberación de GSH por las células B16M-F10 se lleva a cabo por dos sistemas complejos: uno dependiente de Bcl-2 y sensible a L-metionina, y otro correspondiente a MRP1. Nos planteamos identificar el mecanismo molecular Bcl-2-dependiente. Se estudió un canal que también está implicado en el flujo de GSH y que en los últimos años se ha visto que se expresa en muchos tipos de células tumorales, investigando su posible relación con los mecanismos ya estudiados. Esta proteína era el regulador transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). Se observó que CFTR estaba directamente involucrado en el transporte de GSH desde el citosol al espacio extracelular y correspondía a un canal sensible a Bcl-2.
Para potenciar la salida de GSH de las células se probó una combinación de verapamil (VRP, aumenta el transporte de GSH vía MRP1) con un antisentido contra bcl-2 (bcl-2-AS). bcl-2-AS y VRP incrementaron las velocidades de flujo de GSH. El contenido de GSH intracelular disminuyó significativamente en el caso de tratamiento con bcl-2-AS y VRP. Pero, a las 12 horas los niveles de GSH fueron un 70% mayores que los controles en el tratamiento con bcl-2-AS y VRP. Estos resultados mostraban que la pérdida de GSH aceleraba su síntesis intracelular. Vimos que podríamos limitar la síntesis de GSH si conseguíamos inhibir la actividad de la enzima -GT. Con esta idea realizamos experimentos donde inhibíamos dicha enzima mediante la utilización de acivicina (ACV), un inhibidor de la -GT. Con bcl-2-AS, VRP y ACV, la velocidad de síntesis de GSH fue similar a la condición control y la salida de GSH fue tres veces superior al control.
la terapia de depleción selectiva de GSH y Bcl-2 presentada aquí, puede potenciarse al combinarla con dosis no tóxicas de TNF- y con GED.
Investigamos los efectos de una depleción de mtGSH y un tratamiento con TNF sobre las células B16. El estudio se realizó con células adaptadas a glutamina (B16M-Gln+).
Una combinación de GED, TNF- y bcl-2-AS podría teóricamente disminuir la supervivencia de células B16M con alto poder metastático. Se vio que, en células adaptadas a Gln y tratadas con bcl-2-AS, la viabilidad disminuyó un 88%. Con lo que el bcl-2-AS, en células metastáticas adaptadas a la Gln, facilita la citotoxicidad inducida por TNF-. El aumento en la producción de ROS inducido por TNF-, junto con el tratamiento con bcl-2-AS, afectó a la actividad de la superóxido dismutasa (SOD). Al combinar dos oligonucleótidos antisentido (bcl-2-AS y SOD2-AS) para prevenir la resistencia de las células al estrés oxidativo/nitrosativo inducido por el rmTNF-, aumentó la citotoxicidad. Con esta estrategia experimental disminuimos el número de células malignas viables aproximadamente a un 1% de los valores control. Mediante quimioterápicos clásicos conseguimos eliminar in vitro este 1% de células.; Introduction:
The main cause of death from cancer is due to metastases. Malignant melanoma cell subsets show different degrees of multidrug and radiation resistance. Analysis of a Bcl-2 family of genes revealed that B16 melanoma (B16M)-F10 cells (high metastatic potential) have overexpressed preferentially Bcl-2 ( 5.7-fold). B16M-F10 cells show high GSH content and a decrease in GSH efflux.
Mitochondria do not synthesize GSH. Mitochondrial GSH (mtGSH) depletion facilitates permeability transition pore complex (PTPC) opening, and the release of apoptosis-inducing molecular signals. In previous studies in Ehrlich ascites tumor cells was found that L-glutamate (L-Glu) derived from L-Gln competitively inhibited GSH transport into mitochondria, depleting selectively tumor mtGSH.

Results:
We found that GSH release from B16M-F10 cells is channeled through the multidrug resistance protein 1 (MRP1) and the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR). Bcl-2 inhibits the release of GSH through CFTR facilitating accumulation of GSH within the metastatic cells.
Parallel to the Bcl-2-sensitive CFTR, the transport of GSH by MRP1 can carry out by means of a verapamil (VRP)-dependent active transport. We investigate the combination of VRP with a Bcl-2 antisense phosphorothioate-derivatized oligodeoxynucleotides (bcl-2-AS). bcl-2-AS and VRP increased the GSH efflux. Intracellular GSH content decreased in bcl-2-AS- and VRP-treated B16M-F10 cells. However, at 12 h of perifusion time, GSH levels were ~70% higher. These results showed that the loss of GSH content acelerated its intracellular synthesis. tumor -GT activity and an intertissue flow of GSH increase GSH content in B16M-F10 cells. We tested if adding an irreversible -GT inhibitor (acivicin, ACV) we could decrease GSH synthesis. With bcl-2-AS, VRP and ACV treatment, GSH synthesis was similar to control values whereas the GSH efflux increased.
We can combinate this selective GSH depletion therapy with non toxic dosis of TNF- and L-Gln enriched diets (GED). So, we investigated a combination of GED, TNF- and bcl-2-AS and found that viability of B16M decreased up to 88% respect control values. The increased of TNF--induced ROS and bcl-2-AS treatment afected superoxide dismutase (SOD) activity. Treating B16Mcells with a double anti- antisense therapy (Bcl-2- and SOD2-AS) and TNF- , metastatic cell survival decreased to 1%. Chemotherapy easily removed this minimum percentage of highly resistant metastatic survivors.

Mecanismo de producción de radicales libres en la diabetes: Importancia de la xantina oxidasa e implicación del factor nuclear-KB

Tue, 12 Apr 2011 19:07:11 GMT

Mecanismo de producción de radicales libres en la diabetes: Importancia de la xantina oxidasa e implicación del factor nuclear-KB Romagnoli, Marco Un previo trabajo de nuestro grupo demostró que la expresión y la actividad de la
xantina oxidasa (XO), generan súper oxido en hígado y plasma de animales diabéticos y
que esto aumenta el stress oxidativo en esta enfermedad.
El objetivo de esta tesis doctoral fue el estudio del "role" de los radicales libres (ERON)
generados por la XO en la activación de la cascada de señalización del factor nuclear-
κB (NF-κB) a corto plazo y de la inflamación a largo plazo asociado al daño de la
diabetes.
En el citoplasma p-IKKΒ y p-IκBα están incrementadas en los animales diabéticos.
Estos acompañan en el estrato nuclear de hígado de los animales diabéticos de un
incremento de NF-κB (la proteina p65).
Medimos la expresión hepática de iNOS y COX-2 que están reguladas por el
incremento por el factor de trascripción -κB
La diabetes induce la activación de NF-kB, la cascada de señalización y por
consecuencia la sobra expresión de enzimas inflamatorios. Estos incrementos fueron
eliminados con la administración de alopurinol.
Hemos visto también un aumento de infiltración de neutrofilos en hígado de animales
diabéticos y de presencia en el órgano de muerte celular. En plasma también hemos
comprobado un aumento de ALT en los animales diabeticos. A la luz de los resultados
obtenidos, podemos extraer las conclusiones que se enumeran a continuación:
- El mecanismo de formación de radicales libres en un modelo de diabetes experimental
a corto plazoimplica la activación de la xantina oxidasa. La inhibición de la enzima con
alopurinol tiene un efecto protector frente al incremento en la oxidación del glutatión
sanguíneo y hepático, frente a los niveles de lipoperóxidos y frente al incremento en los
oxisteroles en el hígado de los animales diabéticos.
- El mecanismo de formación de radicales libres en un modelo de diabetes experimental
a largo plazo (28 días) no sólo implica la activación de la enzima xantina oxidasa.
Otros mecanismos deben estar implicados.
- La diabetes inducida con estreptozotocina provoca un aumento en el marcador de
daño hepático alanina aminotransferasa en plasma, y en las áreas de necrosis
determinadas mediante tinción con hematoxilina-eosina. La administración de
alopurinol previene ambas alteraciones.
- La administración de alopurinol no modifica los criterios diagnósticos de la
enfermedad: glucosuria o hemoglobina glicosilada, en ninguno de los modelos
utilizados (corto y largo plazo).
- La vía de señalización de NF-κB se activa en la diabetes experimental. La
administración de alopurinol previene la activación de la cascada de señalización de
NF-κB.
- La administración de alopurinol previene la expresión génica asociada a la activación
del factor de transcripción NF-κB. Los niveles citosólicos de iNOS y COX-2 aumentan
de forma significativa en el hígado de los animales diabéticos. La administración de
alopurinol previene dicho incremento de forma significativa.
- La diabetes inducida con estreptozotocina provoca un aumento significativo de la
infiltración de neutrófilos y en los niveles de las citocinas pro-inflamatorias IL-6 y IL-
1β en el tejido hepático. Estas modificaciones se previenen de forma significativa con
la administración de alopurinol únicamente en el modelo a corto plazo.
- La administración de alopurinol puede tener un efecto positivo en la prevención de las
complicaciones relacionadas con el estrés oxidativo en la diabetes experimental
inducida con estreptozotocina, especialmente en las fases iniciales de la enfermedad.
Esta tisis abre la posibilidad de tratar la inflamación a largo plazo y las complicaciones
diabéticas con alopurinol; Previous work from our laboratory showed that the
expression and activity of xanthine oxidase, a superoxide
generating enzyme, increases in the liver and plasma of
diabetic animals and that this is a significant cause of
the oxidative stress which occurs in the disease. The aim
of this work was to study the role of ROS generated by XO
in the activation of cell signalling pathways leading to
inflammation and to long term damage associated to
diabetes. Cytosolic phospho-IKKβ and phospho-IκBα contents
were increased in the diabetic animals. This was
accompanied with increased levels of NF-κB (p65 protein
content) in liver nuclear extracts. Subsequently the
hepatic expression of two inflammatory enzymes, iNOS and
COX 2, that are regulated by NF-κB was increased. The
diabetes-induced activation of NF-κB signaling cascade and
subsequent overexpression of inflammatory enzymes was
abolished by administration of allopurinol. Moreover we
found an increase in neutrophil infiltration in the liver
of diabetic animals and even some level of hepatic necrosis
(evidenced by histological examination as well as by an
increase in the plasma activity of alanine amino
transferase). This was also prevented by administration of
allopurinol. These studies open up the possibility of
treating inflammatory long term complications of diabetes
with allopurinol.

Alteraciones vasculares en la insuficiencia renal crónica. Papel del endotelio.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:10 GMT

Alteraciones vasculares en la insuficiencia renal crónica. Papel del endotelio. Mauricio Aviñó, Mª Dolores El síndrome urémico resulta de la disminución marcada de la función renal. Este estado mantenido conduce a la insuficiencia renal crónica, que se define como la destrucción progresiva e irreversible de las nefronas.
En la insuficiencia renal crónica se dan cita diferentes factores de riesgo cardiovascular, la propia uremia supone un factor de riesgo. La causa principal de morbi-mortalidad en estos pacientes deriva de alteraciones en el sistema cardiovascular.
El tratamiento mediante hemodiálisis ha supuesto la prolongación de la vida para estos enfermos, pero a la vez, ha acarreado problemas relacionados con alteraciones cardiovasculares.
En la presente tesis se estudian las vías de síntesis de factores endoteliales que pueden estar alteradas por la enfermedad y que pueden ser las responsables, al menos en parte, de las alteraciones vasculares que padecen estos enfermos. Nos centramos en la participación de los factores endoteliales relajantes: prostaciclina, NO y EDHF, observando que la uremia produce una disminución de su síntesis o liberación en respuesta a estímulos vasodilatadores y vasoconstrictores.
Las alteraciones vasculares que puede ocasionar el tratamiento con hemodiálisis, ha puesto de manifiesto que aunque disminuye la participación de NO en la respuesta vascular, aumenta la de EDHF. Estos resultados son importantes, pues suponen la aparición de un mecanismo compensatorio, capaz de mejorar la función endotelial.
El estudio de la expresión de genes implicados de manera directa o indirecta en la reactividad vascular sugiere que la enfermedad podría tener su origen en un fallo metabólico, puesto que nuestros resultados muestran una menor expresión génica de DDAH-1. Esta enzima es la encargada de metabolizar las toxinas que se acumulan en la uremia y que son inhibidores enzimáticos, causando gran parte de la disfunción vascular y alteraciones neurológicas que aparecen en esta enfermedad.
Las modificaciones enzimáticas que hemos observado en la insuficiencia renal crónica podrían ser dianas terapéuticas para mejorar la calidad de vida en estos enfermos.; Uremia is an established risk factor for cardiovascular and cerebrovascular accidents. Hemodialysis improves the life's quality of these patients, but this treatment also produces vascular alterations.
We examined the relaxant and contractile response in forearm veins from patients with chronic renal failure before hemodialysis, on chronic hemodialysis and in veins obtained from donors (controls).
We study the role of vasodilator prostaglandins (PGI2), nitric oxide (NO) and endothelium derived hyperpolarizing factor (EDHF). The contribution of these factores is diminished in chronic renal failure. This effect might contribute to, or even cause, some of the vascular features of this condition. Hemodialysis improves the endothelial function because of an augmented participation of EDHF.
The study of gene expression showed a metabolic failure in the enzyme that degrades the uremic toxins. The low expression of this enzyme, dimethylarginine dimethylamino hydrolase (DDAH), could explain some vascular features and could be a therapeuthic strategy for improving life's quality of these patients.

Estudio de utilización de analgésicos y antiinflamatorios no esteroideos en población rural.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:10 GMT

Estudio de utilización de analgésicos y antiinflamatorios no esteroideos en población rural. Montejano Juan, Julia El dolor es el síntoma más frecuente en los pacientes de Atención Primaria (AP) y constituye un problema de salud pública por su coste sanitario, económico y social. A pesar de la existencia de numerosos fármacos analgésicos, los pacientes siguen experimentando dolor que podría evitarse con un manejo más eficiente de la terapéutica. La mejor forma de conocer cómo se usan los medicamentos son los estudios de utilización. Dado que existen pocos estudios de este tipo en AP en España, hemos planteado uno que tiene como objetivos: obtener un patrón de utilización de analgésicos y AINE para el tratamiento del dolor en una población rural (municipios de Navarrés, Bicorp y Quesa (Valencia)) y datos de efectividad de los tratamientos utilizados.

Participan 265 de los 800 pacientes que acuden a la consulta de AP para repetir recetas de algún analgésico o AINE (95 días elegidos al azar a lo largo de 12 meses). Registramos: motivo de uso del fármaco, pauta de administración, duración del tratamiento, origen de la prescripción (AP, Especialista, Farmacia, Urgencias), uso concomitante de otros fármacos y se interroga al paciente sobre la existencia de dolor en ese momento. Si la respuesta es afirmativa se valora la intensidad con Escala Visual Analógica (EVA, línea de 100mm sin marcas intermedias y extremos señalados con trazos verticales y etiqueta "no dolor" y "dolor insoportable"). En algunos casos se utiliza Escala Verbal Numérica (EVN 0-10). Estadística descriptiva, t de Student para comparar medias y Ji2 o cálculo de Odds Ratio para comparar proporciones (p<0,05).

Resultados: 202 mujeres y 63 hombres (66,0+14,0 años (20-93)), sin diferencias entre hombres y mujeres. 151 pacientes recibían al menos otro AAP/AINE además del objeto de estudio. 131 pacientes manifestaron tener dolor actual. 98 fueron evaluados mediante EVA. La intensidad media del dolor fue de 36,3+19,6mm (2-100) que corresponde a dolor moderado-intenso (>30mm). En 24 casos, por falta de colaboración, se empleó EVN con un valor medio de 3,35+1,97 (1-9) y en 9 no fue posible evaluar el grado de dolor. 60 pacientes (48 mujeres y 12 hombres) señalaron valores que representan dolor moderado o intenso (49,08+14,24mm en mujeres y 46,25+11,77mm en hombres). 8 pacientes valorados con EVN indicaron valores superiores a 3. No hay diferencias significativas entre los fármacos, las pautas de administración y las indicaciones de los pacientes con dolor moderado o intenso y los que no tienen dolor.

Conclusiones: Uno de cada cuatro pacientes que acuden a repetir recetas lo hace para solicitar un AAP/AINE. El perfil del paciente que solicita recetas de AAP/AINE es mujer, mayor de 65 años, con diagnóstico de artrosis, lumbalgia o cefalea, que trata con paracetamol, ibuprofeno o metamizol, y cuyo tratamiento se ha iniciado en AP. El uso de paracetamol e ibuprofeno se realiza de acuerdo con las indicaciones de la ficha técnica y puede considerarse correcto, mientras que el de metamizol, no se ajusta a la ficha y por tanto es incorrecto. Un 40% de los pacientes reciben gastroprotectores, cuyo uso en muchos casos es injustificado. Casi la mitad de los pacientes usuarios de AAP/AINE reciben simultáneamente al menos otro fármaco de este grupo. Casi la mitad de los pacientes usuarios de AAP/AINE manifiestan sentir dolor en el momento de la entrevista. Más de la mitad de los pacientes tratados con analgésicos o antiinflamatorios que refieren dolor, presentan un dolor moderado o intenso. La mayor parte de los pacientes usan pautas inadecuadas, lo que podría explicar la falta de efectividad del tratamiento con analgésicos o antiinflamatorios. En población rural usuaria de servicios sanitarios hay una elevada prevalencia de dolor que es tratado de forma inadecuada.; Objectives: The goal of the study is to analyze the pattern of utilization and efficacy in patients treated with analgesic or non steroidal antiinflammatory drugs (A/NSAID) attended in Primary Care
The study was carried out in a basic health area in Navarrés (Valencia, Spain) with an approximate population of 4400 inhabitants.

Methods: Descriptive, cross-sectional, dug utilization study. Eligible patients were those that had sought a prescription of a drug of ATC groups M01A, N02A and N02B for their own use. Data collection was carried out between the months of November 2004 and November 2005. Patients were asked about the reason to use A/NSAID drugs, the therapeutic schedule and if they experienced any pain complaint in the moment of the visit. If the answer was affirmative pain was evaluated by means of a standard horizontal visual analogue scale (VAS) of 100 mm or a verbal numerical scale (VNS). The data are presented as descriptive statistics; mean comparisons were calculated with the Student's t test (p<0,05).

Results: 265 patients were included (76,2% women; 66,1±13,9 years old (20-93)). Paracetamol, metamizol and ibuprofen were the most commonly drugs used. 15,1% of patients were taken fixed analgesic combinations. Osteoarthritis, low back pain and headache were the most frequent causes for A/NSAID utilization. 131 patients (49,4%; CI95% 43,3-55,4%) described suffering pain in the moment of the visit. In 98 the pain was evaluated by means of VAS (median value: woman 48 mm; men 45 mm) and in 24 with VNS (median value 2,5). 60 patients evaluated with VAS put the mark on the scale in values upper 30 mm which is considered moderate-severe pain. The analgesic regime vary widely and only 45,3% of patients used the drugs continuously at regular intervals.

Conclusions: Approximately half of the patient users of A/NSAID suffered pain and many of them had a clinically relevant pain probably related with both incorrect analgesic election and schedule. The profile of the patient who asks for A/NSAID prescription is woman, higher than 65 years, with diagnosis of osteoarthritis, low back pain and headache, treated with paracetamol, ibuprofen or metamizol initially prescribed in Primary Care.

Efectos del ejercicio físico crónico sobre la refractariedad miocárdica ventricular, la velocidad de conducción y el patrón fibrilatorio ventricular intrínsecos, tras la oclusión arterial coronaria aguda: un estudio experimental.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:09 GMT

Efectos del ejercicio físico crónico sobre la refractariedad miocárdica ventricular, la velocidad de conducción y el patrón fibrilatorio ventricular intrínsecos, tras la oclusión arterial coronaria aguda: un estudio experimental. Orts Candela, Leonor Introducción: numerosas investigaciones indican que el ejercicio físico crónico puede proteger frente a la muerte súbita cardiaca, las razones por las cuales el ejercicio físico ejerce efectos beneficiosos no están dilucidadas. El objetivo de este trabajo es comprobar si el ejercicio físico crónico puede modificar, por mecanismos intrínsecos, alguna de las características electrofisiológicas directamente relacionadas con la producción de arritmias por re-entrada, como es la fibrilación ventricular (FV), y si dichas modificaciones se manifiestan tras la oclusión arterial coronaria aguda, así como comprobar si el ejercicio físico puede modificar la heterogeneidad electrofisiológica, que se produce en el miocardio isquémico.

Métodos: 14 conejos fueron sometidos a un programa de entrenamiento de seis semanas y 12 conejos no fueron entrenados, posteriormente fueron anestesiados (ketamina 25 mg/kg i.v.), se sacrificaron, se aislaron los corazones y se conectaron a un sistema de Langendorff. Se situaron dos electrodos en ventrículo izquierdo, uno de estimulación y otro de registro. La FV fue inducida mediante a estimulación a frecuencias crecientes antes de la oclusión coronaria y posteriormente se desfibrilaba. Para producir la FV después de la oclusión se aplicaron varias series de extraestímulos acoplados a los 5, 15 y 30 minutos de la oclusión coronaria. Se determinaron antes y tras la oclusión coronaria, el periodo refractario efectivo ventricular (PREV), el periodo refractario funcional ventricular (PRFV), la velocidad de conducción (VC), la longitud de onda (LO), la inducibilidad de la FV, la frecuencia dominante de la FV (FD) media, máxima y mínima, mediante análisis espectral y el coeficiente de variación (CV) de la frecuencia dominante de la FV, como índice de heterogeneidad.

Resultados: previamente a la oclusión coronaria aumentó en el grupo entrenado con respecto al grupo control el PREV (109±9 vs 101±12, p<0.05), el PRFV (123±7 vs 117±8, p<0.05), la VC (96.6±19.1 vs 80.1±13.8, p<0.05) y la LO (12.5±2.4 vs 10.1±1.7, p<0.05). La FD mínima disminuyó en el grupo control al comparar la situación basal con el minuto 35 de la oclusión (9.9±3.1 vs 5.4±1.5, p<0.05 ) y el CV aumentó en el grupo control al comparar la situación basal con el minuto 5 (11.9±5.4 vs 24.4±11.7, p<0.05) y 35 de la oclusión (11.9±5.4 vs 20±11.5, p<0.05). En el grupo entrenado no se observaron diferencias ni en la FD mínima ni en el CV. Respecto a la inducibilidad de la FV no se observaron diferencias entre grupos.

Conclusiones: el ejercicio físico crónico aumenta la refractariedad ventricular, la VC y la LO del proceso de activación miocárdico ventricular, pero las modificaciones no se mantienen tras la oclusión arterial coronaria aguda. Disminuye la heterogeneidad miocárdica ventricular producida por la oclusión arterial coronaria aguda y disminuye la caída de la FD mínima (parámetro relacionado con el estado metabólico en la isquemia miocárdica). Por tanto, exhibe efectos beneficiosos, mediante la modificación de propiedades electrofisiológicas intrínsecas, que probablemente dificulten la instauración de arritmias por re-entrada.; Several reports indicate that chronic exercise can protect against cardiac sudden death. Nevertheless, the reasons why physical training exerts beneficial effects are not completely understood The objective of this research was to investigate the effect of physical training on the electrophysiological myocardial properties like refractoriness, conduction velocity, wave length, and the effect on the electrophysical heterogeneity of ischemic myocardium, by means of the dominant frequency (DF) of ventricular fibrillation (VF) analysis. Fourteen New Zealand rabbits were submitted to a six-week endurance exercise training program, and twelve controls were not trained. Then, rabbits were anaesthetized (ketamine, 25 mg/kg i.v.), killed and the hearts excised, isolated and perfused in a Langendorff system. A pacing electrode and a plaque with 256 recording electrodes were positioned on the left ventricle. VF was induced by pacing at increasing frequencies before to the coronary artery occlusion (CAO) and later defibrillated. To produce VF after CAO two successive series of coupled extrastimuli were applied five and fifteen minutes after the CAO, and if VF did not appear, the arrhythmia was induced by ventricular pacing at increasing frequency 30 min. after CAO. DF of VF was determined by a spectral analysis (Welch's method). Mean DF of VF and its standard deviation in each experiment was determined in order to calculate the variation coefficient (VC), as an index of myocardial heterogeneity. Maximum and minimum DF were also determined. VC increased 5 min (11.9±5.4 vs 24.4±11.7, p<0.05) and 35 min (11.9±5.4 vs 20±11.5, p<0.05) after CAO versus basal value in the control group, but did not change in the trained group. Minimum DF decreased 35 min after CAO versus basal value in the control group (9.9±3.1 vs 5.4±1.5, p<0.05), but did not change in the trained. These results indicate that physical training could exert beneficial effects against ischemic reentrant arrhytmias, by means of decreasing myocardial heterogeneity.

Efecto de la administración de antioxidantes orales en las adaptaciones al ejercicio físico.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:09 GMT

Efecto de la administración de antioxidantes orales en las adaptaciones al ejercicio físico. Doménech de Antonio, Elena Durante el ejercicio físico se producen radicales libres en el interior de la célula
muscular. Éstos pueden actuar como señales reguladoras en diversas
funciones fisiológicas del músculo, como por ejemplo su fuerza contráctil, su
capacidad para generar ATP, etc. Se sabe que el entrenamiento aeróbico
empleando una determinada frecuencia, intensidad y duración, puede
aumentar el contenido mitocondrial entre un 50% y un 100% en un período
aproximado de seis semanas. El mayor contenido mitocondrial hace que se
produzca un aumento en la resistencia independientemente de los pequeños
cambios que se producen a nivel de consumo máximo de oxígeno. El proceso
de biogénesis mitocondrial implica directamente a las proteínas: PGC-1, NRF-
1, tfam, citrato sintasa y citocromo c. Además se ha demostrado que el
entrenamiento aeróbico induce la expresión enzimas antioxidantes como la
superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa. Durante muchos años se ha
especulado que la toma de antioxidantes durante el período de entrenamiento
podía influir en el rendimiento del mismo. Se ha probado que la administración
de antioxidantes mientras se realiza ejercicio físico agotador tiene efectos
beneficiosos, ya que se evita el daño muscular y el estrés oxidativo asociado a
ejercicio físico agotador. Cuando se realiza ejercicio físico hasta el
agotamiento, la generación de especies reactivas del oxígeno excede la
capacidad antioxidante de la célula, y por tanto la prevención de esta
formación, es clave para revertir el daño muscular asociado al estrés oxidativo.
Nuestra hipótesis de trabajo se basó en que los radicales libres producidos
durante el ejercicio físico actúan como señales para que se produzca el
proceso de biogénesis mitocondrial, y que la toma de antioxidantes orales
como el alopurinol, y la vitamina C frena esta adaptación. Nuestros resultados
muestran como la cascada que conduce a la biogénesis mitocondrial se ve
bloqueada debido a la suplementación con antioxidantes orales. Del mismo
modo, el rendimiento tras el entrenamiento de las ratas y humanos
suplementados con los antioxidantes, fue menor que el del grupo placebo. La
inducción de enzimas antioxidantes que se produjo con el entrenamiento, se
vio bloqueada en los grupos suplementados con antioxidantes. Por tanto
podemos concluir que los radicales libres producidos durante el ejercicio juegan
un papel clave en las adaptaciones al entrenamiento aeróbico y que la
administración de antioxidantes durante este periodo no es recomendable,
mientras que sí lo es durante el ejercicio físico agotador.; Exercise practitioners often take supplements with antioxidant vitamins, we wanted
to test their effect on training efficiency in both rats and humans.
The human study was double blind and randomized. We trained 14 subjects for 8
weeks. Five subjects took 1g of vitamin C daily. In the animal study, 36 male
Wistar rats were exercised for 3 or 6 weeks. Twelve animals were treated daily
with vitamin C (0,24 mg/cm2 of body surface). Training was estimated measuring
running capacity to exhaustion (in rats) or increases in VO2max (in persons). The
effect of training on muscle mitochondrial biogenesis and antioxidant enzyme
expression was also measured.
We found that in persons, 8 weeks of training increased VO2max by 22% (p<0.05).
However, in the group that took vitamin C the increase was non significant.
Untrained rats ran for 100 minutes and after 6 weeks of training they ran for 300
minutes, but the group of rats treated with vitamin C ran for 120 minutes only. We
offer a molecular explanation for this, that vitamin C decreases exercise-induced
expression of transcription factors involved in mitochondrial biogenesis and
of markers of mitochondrial content. It also prevents the increase in the expression
of antioxidant enzymes such as manganese superoxide dismutase (Mn-SOD) or
glutathione peroxidase (GPx) which occurs after training. Vitamin C
supplementation decreases training efficiency in humans and in animals because it
prevents cellular adaptations to exercise.

Modificaciones del patrón fibrilatorio ventricular por el estiramiento regional del ventrículo izquierdo: estudio en corazón aislado de conejo.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:08 GMT

Modificaciones del patrón fibrilatorio ventricular por el estiramiento regional del ventrículo izquierdo: estudio en corazón aislado de conejo. Trapero Gimeno, Isabel Introducción: Se parte de la hipótesis de que las modificaciones locales de las propiedades electrofisiológicas, si se circunscriben a zonas de extensión limitada, deben causar escasos cambios en el proceso global de activación durante la fibrilación ventricular (FV). Para comprobarlo, se produce un estiramiento local del miocardio, en la pared libre del ventrículo izquierdo, y se analizan diversos parámetros electrofisiológicos, tanto en situación de ritmo sinusal como durante la arritmia. Los parámetros relacionados con la FV son la frecuencia dominante de la fibrilación ventricular (FrD), los intervalos VV durante la arritmia y el análisis de los mapas de activación de la fibrilación ventricular. Todo ello se analiza en la parte del ventrículo izquierdo donde se aplica el estiramiento localizado (ZE), y en una zona cercana, en el mismo ventrículo, no modificada por el estiramiento (ZNE).
También se evalúa la hipótesis de que las modificaciones de la activación miocárdica durante la fibrilación ventricular producidas por el estiramiento agudo pueden ser contrarrestadas por la acción de un bloqueante de los canales sensibles al estiramiento.

Métodos: Se estudiaron 31 preparaciones de corazón aislado y perfundido de conejo, según la técnica de Langendorff y, mediante técnicas de análisis espectral y tiempo frecuencia, se analizaron los registros de FV obtenidos con dos electrodos múltiples situados en ZE y ZNE antes, durante y tras la supresión del estiramiento localizado producido con un dispositivo intraventricular situado en ventrículo izquierdo. El estudio se repitió ante la presencia de un fármaco bloqueante de los canales activados por el estiramiento, la estreptomicina, que se disolvió a una concentración de 200µM en la solución que perfundía la preparación experimental.

Resultados: El estiramiento local agudo acelera la FV en la ZE de manera reversible y en grado variable dependiendo de la magnitud del estiramiento y del tiempo transcurrido desde su aplicación. A los cinco minutos tras la aplicación del estiramiento, en la ZE, la FrD aumenta (15.2±1.9Hz vs 18.8±2.5Hz, p<0.0001), la media de los intervalos VV disminuye (63±8ms vs 53±6 ms, p<0.001), y aumenta la complejidad de los mapas de activación, con más áreas de bloqueo de la conducción y más patrones de afloramiento epicárdico (23% vs 37%, p<0.01), sin cambios significativos en los porcentajes de patrones con reentrada circular completa (9% vs 9%, n.s.). Simultáneamente en la ZNE no se observaron modificaciones en la FrD (15.2±2.1 vs 15.3±2.5 Hz, ns), la media de los intervalos VV (66±8 vs 65±8 ms, ns), ni en el número de mapas con patrones de afloramiento epicárdico (25% vs 20%, ns) o patrones de reentrada circular completa (12% vs 8%, ns). Ante la presencia de estreptomicina, basalmente la fibrilación ventricular es más lenta (frecuencia dominante: 12.5±1.7Hz vs 15.3±1.9Hz, p<0.001; media de los intervalos VV: 76±9ms vs 63±8ms, p<0.005) y la aceleración de la fibrilación ventricular que se observa en la zona sometida al estiramiento es de menor magnitud y duración (frecuencia dominante: 13.6±2.0Hz vs 18.6±2.5Hz, p<0.001; media de los intervalos VV: 65±8 vs 53±6, p<0.005).

Conclusiones: El estiramiento localizado incrementa las heterogeneidades electrofisiológicas del miocardio y acelera e incrementa la complejidad de la FV en la ZE sin modificar significativamente los patrones de activación en la ZNE. La estreptomicina atenúa las modificaciones electrofisiológicas y de la activación miocárdica durante la fibrilación ventricular producidas por el estiramiento y tiene un efecto directo sobre la refractariedad y la frecuencia de activación durante la fibrilación ventricular.; INTRODUCTION: We hypothesize that local modifications in electrophysiological properties, when confined to zones of limited extent, induce few changes in the global activation process during ventricular fibrillation (VF). To test this hypothesis, we produced local electrophysiological modifications by stretching a circumscribed zone of the left ventricular wall in an experimental model of VF.

METHODS AND RESULTS: In 23 Langendorff-perfused rabbit hearts frequency, time-frequency and time-domain techniques were used to analyze the VF recordings obtained with two epicardial multiple electrodes before, during, and after local stretching produced with a left intraventricular device. Acute local stretching accelerated VF in the stretched zone reversibly and to a variable degree, depending on the magnitude of stretch and the time elapsed from its application. In the half time (5 minutes) of the analyzed period, a longitudinal lengthening of 12.1 +/- 4.5% (vertical axis) and 11.8 +/- 6.2% (horizontal axis) in the stretched zone produced an increase in the dominant frequency (DFr) (15.2 +/- 1.9 versus 18.8 +/- 2.5 Hz, P < 0.0001), a decrease in mean VV interval (63 +/- 8 versus 53 +/- 6 msec, P < 0.001), and an increase in the complexity of the activation maps-with more areas of conduction block and more breakthrough patterns (23% versus 37%, P < 0.01), without significant changes in the percentages of complete reentry patterns (9% versus 9%, ns). Simultaneously, in the nonstretched zone, no variations were observed in the DFr (15.2 +/- 2.1 versus 15.3 +/- 2.5 Hz, ns), mean VV intervals (66 +/- 8 versus 65 +/- 8 msec, ns), or types and percentages of maps with breakthrough (25% versus 20%, ns) or reentry patterns (12% versus 8%, ns). No significant correlation was observed between the DFr in the two zones (R = 0.24, P = 0.40).

CONCLUSION: Local stretching increases the electrophysiological heterogeneity of myocardium and accelerates and increases the complexity of VF in the stretched area, without significantly modifying the occurrences of the types of VF activation patterns in the nonstretched zone.

Bases moleculares de la depleción de glutatión y de la necrosis celular en la pancreatitis aguda. Papel de las proteín quinasas activadas por mitógenos.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:08 GMT

Bases moleculares de la depleción de glutatión y de la necrosis celular en la pancreatitis aguda. Papel de las proteín quinasas activadas por mitógenos. Pereda Cervera, Javier La pancreatitis aguda es el proceso inflamatorio agudo del páncreas con afectación variable de otros tejidos regionales y sistemas orgánicos alejados. Es una enfermedad con una incidencia relativamente elevada en España y en el resto del mundo y con una mortalidad entre el 10 y el 45% de los casos graves de la enfermedad. Los mecanismos moleculares por los que una pancreatitis aguda se desarrolla, así como aquellos que conducen a una pancreatitis grave, aún no están del todo esclarecidos.
Se ha descrito que el glutatión, que es el antioxidante intracelular más abundante de la célula, sufre una depleción en modelos de pancreatitis experimental. Esta depleción está relacionada con mayor gravedad de la enfermedad, así como mayor mortalidad de las células acinares por necrosis.
El objetivo de la presente tesis ha sido determinar los mecanismos responsables de la depleción de glutatión en el páncreas en la pancreatitis aguda experimental.
Utilizando dos modelos experimentales de pancreatitis aguda se han obtenido las siguientes conclusiones:
En la pancreatitis aguda necrótica inducida con taurocolato en ratas se produce una depleción severa y precoz de glutatión reducido en el tejido pancreático. Esta depleción se mantiene durante al menos nueve horas tras la inducción de la pancreatitis.
Se observa una inducción ineficaz de la -glutamil cisteína sintetasa en páncreas durante la pancreatitis aguda severa que podría contribuir a la depleción mantenida de glutatión. En la pancreatitis aguda necrótica inducida con taurocolato no aumenta la expresión de las subunidades de la -glutamil cisteína sintetasa durante las primeras horas, a pesar de la unión de la ARN polimerasa II tanto a los promotores como a los exones de los genes que codifican las subunidades de esta enzima. Sin embargo, en la pancreatitis aguda edematosa inducida en ratas con ceruleína se produce de forma precoz un gran aumento en la expresión de la subunidad catalítica de la -glutamil cisteína sintetasa. Esta marcada inducción se debe principalmente a la unión de los factores de transcripción NF-B, SP-1 y c-Myc al promotor.
En la pancreatitis aguda experimental inducida con taurocolato se produce de forma temprana un aumento en la fosforilación de las quinasas ERK 1/2, JNK y p38 en el páncreas. Posteriormente, desciende progresivamente la fosforilación de las mismas hasta alcanzar niveles semejantes al control a las seis horas tras la inducción. El tratamiento con pentoxifilina previene la fosforilación de ERK 1/2 y de JNK, mientras que el oxipurinol previene la fosforilación de p38. El tratamiento combinado con pentoxifilina y oxipurinol previene simultáneamente la fosforilación de las tres principales familias de MAP quinasas.
El TNF- no tiene un papel significativo en la depleción de glutatión en la pancreatitis aguda dado que la depleción de glutatión asociada a la pancreatitis aguda inducida por ceruleína se produce tanto en ratones control wild type como en ratones knockout de TNF- o de los receptores de TNF-.
La inhibición de la vía de ERK previene la depleción de glutatión inducida con taurocolato in vitro tanto en células acinares como en células AR42J. No obstante, JNK y p38 no influyen significativamente en esta depleción de glutatión.
El inhibidor de proteasas AEBSF previene la depleción de glutatión inducida por taurocolato en células AR42J. Sin embargo, las proteasas lisosomales, el proteasoma, el calcio y la -glutamil transpeptidasa no juegan un papel significativo en la depleción de glutatión.
El AEBSF, inhibidor de la depleción de glutatión, disminuye la necrosis inducida por taurocolato en células AR42J, aumentando la muerte celular por apoptosis.
Por tanto, nuestros resultados sugieren que la depleción de glutatión en páncreas en la pancreatitis aguda se debe a una proteasa o peptidasa no lisosomal dependiente de MAP quinasas, no dependiente de calcio e inhibible por AEBSF.; Acute pancreatitis is an inflammation initially localized in the pancreatic gland which may lead to local and systemic complications. The development of severe acute pancreatitis is mediated by pathophysiological mechanisms involved in the systemic inflammatory response, cytokines and oxidative stress being their components of major importance. Nevertheless, it is still unknown why an episode of acute pancreatitis remains mild or progresses to a severe form. Glutathione depletion occurs in pancreas during acute pancreatitis and it has been related to necrosis cell death and severity of the disease.
The aim of this study is to clarify the mechanism involved in glutathione depletion in experimental acute pancreatitis.
Taurocholate-induced acute pancreatitis was used as a severe experimental model of the disease whereas caerulein-induced acute pancreatitis was used as a mild experimental model.
Results showed that ineffective induction of -glutamil cistein synthetase occurs after taurocholate-induced acute pancreatitis. However, caerulein induced pancreatitis produced high expresion of this enzyme.
Taurocholate-induced acute pancreatitis showed early activation of the three major families of mitogen-activated protein kinases. In this model, pentoxifylline prevented JNK and ERK activation while oxypurinol prevented p38 activation. Combined treatment of pentoxifylline and oxypurinol almost abolished MAPK phosphorylation in the pancreas.
TNF- did not play an important role in glutathione depletion because this depletion associated with caerulein-induced pancreatitis occurred similarly in wild type mice, TNF- knockout mice and TNF- receptor knockout mice.
ERK inhibition prevented taurocholate-induced glutathione depletion in acinar cells and AR42J cells. However, JNK and p38 were not implicated in glutathione depletion produced by taurocholate in this cell line.
AEBSF, a serin protease inhibitor, prevented glutathione depletion in AR42J cells. In addition, AEBSF diminished taurocholate-induced necrosis increasing apoptosis cell death. Conversely, lysosomal proteases, proteasome, calcium and -GT did not play a significant role in glutathione depletion in AR42J.
Therefore, our results suggest that glutathione depletion occurs not by lysosomal but MAP kinase-dependent, calcium-independent protease or peptidase which is inhibited with AEBSF.

Introducción de la tecnología de transferencia génica en lubina (Dicentrarchus labrax)

Tue, 12 Apr 2011 19:07:07 GMT

Introducción de la tecnología de transferencia génica en lubina (Dicentrarchus labrax) Muñoz Forcada, Iciar Este trabajo abarca distintos aspectos de la metodología de la transferencia
génica en lubina, tanto in vitro como in vivo. Por una parte, se ha centrado en el estudio
y evaluación de la transferencia génica somática como posible sustitución a la
transgénesis estable en distintas aplicaciones. Por otra parte, se ha evaluado el sistema
de regulación por tetraciclina para la regulación exógena de genes en peces. Por último,
se ha probado que una línea celular de lubina puede utilizarse como sistema de
expresión de genes exógenos.
Por primera vez se demuestra que la inyección de DNA plasmídico es eficiente
para transferir genes exógenos a músculo de lubina. Los factores que favorecen la
expresión son, dosis altas de plásmido, el uso de un promotor adecuado, y un estado
metabolicamente activo del músculo. La expresión que se obtiene es transitoria,
alcanzándose el máximo cinco días después de la inyección. Una limitación de esta
técnica es la incapacidad de reproducir en los distintos individuos inyectados, la
manera exacta en que la aguja de inyección entra en el paquete muscular, lo que
origina una gran variabilidad en cuanto a la toma de DNA por parte de las células, y
por tanto en el nivel de expresión del transgen. Esto se puede mejorar aumentando el
número de animales inyectados para disminuir así el error debido a la técnica, o usando
una segunda construcción para normalizar la transfección.
La técnica de inyección de DNA en músculo se ha ensayado como método de
vacunación en peces. Sin embargo, ésta es la primera vez, que se prueba esta técnica en
peces para secretar una hormona en sangre. Como gen a inyectar se ha diseñado y
construido un gen híbrido que codifica una hormona gonadotropa de cadena única de
lubina. Tras su inyección en músculo de lubina se pudo detectar la proteína en plasma.
Para sistemas de origen piscícola, no se dispone hasta el momento de un método
que permita controlar la expresión de genes exógenos de manera fiable. Por primera
vez, hemos probado la utilidad del sistema de regulación por tetraciclina para esta
misión. Tras valorar diferentes versiones del sistema en células de pez in vitro y en
músculo in vivo, podemos concluir que la opción más eficiente es el uso del
transactivador tTA bajo el control de un promotor estable.
Al igual que en células de mamíferos, hemos comprobado que las células de pez
también presentan dificultades para mantener el sistema de regulación por tetraciclina
de una manera funcional; como resultado, encontrar clones con un grado de regulación
óptimo y un nivel bajo de expresión basal es difícil. Sin embargo, el uso de una
estrategia basada en el uso del plásmido nuevo pTet-luc+-pur/GFP facilita esta tarea, y
permite obtener un alto porcentaje de clones regulables.
A lo largo de este trabajo se han comparado los promotores CMV, de origen
viral, y el promotor de la actina ß de carpa, para dirigir la expresión de distintos genes
tanto en las líneas celulares EPC y SBL, como en músculo de lubina in vivo. Los
resultados nos permite concluir que el promotor de la actina ß de carpa, es más débil en
cuanto al nivel de expresión génica que logra promover, y menos estable a la hora de
mantenerse en una línea celular que el promotor CMV.
Por último, los resultados obtenidos con la línea celular SBL permiten señalar a
esta línea como un sistema de lubina apto para la expresión de genes exógenos. Estas
células son capaces de secretar los productos de los genes introducidos, con lo que
podrían ser utilizadas para la producción de proteínas recombinantes.; This work focuses on different aspects of the gene transfer methodology in sea bass.
On one hand, the use of the somatic gene transfer has been evaluated as an alternative to the
use of stable transgenesis in different applications. Somatic gene transfer has been used as
method of delivery of a recombinant single-chain gonadotropin into the blood stream in sea
bass. On the other hand, we have evaluated the use of the tetracycline regulated system to
control exogenous gene expression in fish. The results showed that the best choice was the use
of the rtTA transactivator under the control of a stable promoter. Finally, a sea bass cell line
has proven to be an efficient system for the expression of exogenous gene.

Influencia de la diabetes experimental sobre la reactividad de las arterias basilar, carótida y renal de conejo a la endotelina-1.

Tue, 12 Apr 2011 19:07:07 GMT

Influencia de la diabetes experimental sobre la reactividad de las arterias basilar, carótida y renal de conejo a la endotelina-1. González Marrachelli, Vannina Las complicaciones vasculares de la diabetes son principal causa de morbi-mortalidad del paciente diabético. Se ha estudiado la influencia de la diabetes experimental sobre la reactividad de las arterias basilar, carótida y renal a la endotelina-1 utilizando un modelo que permite el registro de la tensión isométrica desarrollada por los diferentes segmentos arteriales. Las conclusiones obtenidas han sido:
1. La diabetes experimental modifica la respuesta vascular a la endotelina-1 de forma dependiente del lecho vascular estudiado.
2. La diabetes induce hiperrreactividad de la arteria basilar de conejo a la endotelina-1 a través de al menos tres mecanismos: (1) menor modulación inhibitoria endotelial de esta respuesta, incluyendo la alteración de la actividad de los receptores endotelinérgicos ET-B endoteliales; (2) menor sensibilidad al óxido nítrico de las células del músculo liso vascular; y (3) mayor participación de los receptores endotelinérgicos ET-A y ET-B musculares que median vasoconstricción.
3. La diabetes induce hiperrreactividad de la arteria carótida de conejo a la endotelina-1 a través de al menos tres mecanismos: (1) mayor actividad de los receptores ET-A musculares; (2) alteración de la liberación de óxido nítrico mediada por la activación de los receptores ET-B y (3) mayor producción de tromboxano A2.
4. La hiperrreactividad de las arterias basilar y carótida a la endotelina-1 observada en la diabetes podría ser un factor condicionante del mayor riesgo de enfermedad cerebrovascular del paciente diabético
5. La diabetes induce cambios complejos en los mecanismos reguladores de la respuesta de la arteria renal a la endotelina-1: (1) aumento del NO endotelial; (2) alteración del balance de prostanoides vasoconstrictores (COX-1) y vasodilatadores (COX-2) en favor de estos últimos; (3) disminución del cociente entre prostanoides vasoconstrictores y vasodilatadores liberados tras la activación de los receptores ETA , predominando esta disminución sobre el aumento de dicho cociente tras la activación de los receptores ETB. La suma de todos estos cambios tiene como resultado una disminución de la sensibilidad de la arteria renal a la endotelina-1.
6. Deberían valorarse las posibles implicaciones vasculares del uso terapéutico de fármacos inhibidores de la COX-1 y COX-2 y de fármacos relacionados con la endotelina-1 en el manejo del paciente.; Vascular diabetes complications are the main cause of morbidity and mortality in the diabetic patient. The influence of alloxan-induced diabetes on the reactivity of rabbit basilar, carotid and renal arteries to endothelin-1 was examined by using a model in which isometric tension developed by the arterial segments is recorded. The conclusions obtained from this study are:
1. Experimental diabetes modifies the vascular response to endothelin-1 in a different way depending on the vascular bed.
2. Diabetes induces specific hyperreactivity of rabbit basilar artery to endothelin-1. The authors conclude that at least three causes could contribute to this hyperreactivity: 1) the lower endothelial inhibitory modulation of this response, including impaired activity of the endothelial endothelin ETB receptors which mediate vasodilatation through NO release; 2) the lower sensitivity to NO in the vascular smooth muscle cells; and 3) the greater participation of muscular endothelin ETA and ETB receptors that mediate vasoconstriction.
3. Diabetes induces hyperreactivity of the rabbit carotid artery to ET-1 by a mechanism that at least includes: 1) enhanced activity of muscular ETA receptors; 2) impairment of ETB receptors mediated NO release; and 3) enhancement of the production of thromboxane A2.
4. The hyperreactivity of the basilar and carotid bed to endothelin-1 could contribute to the greater susceptibility to cerebrovascular diseases of diabetic patients.
5. Diabetes induces complexes changes in the regulatory mechanisms that regulate the contractile response of the rabbit renal artery to endothelin-1: 1) enhancement of endothelial NO; 2) altered balance between vasoconstrictor (COX-1) and vasodilator (COX-2) prostanoids in favour of the last ones; and 3) decreased ratio between vasoconstrictor and vasodilator prostanoids released after activation of endothelin ETA receptors predominating on the increased ratio after activation of endothelin ETB receptors. The sum of these changes results in a decrease in the sensitivity of the renal artery to this peptide.
6. The possible vascular implications for the use of COX-inhibitors and endothelin-1 related drugs should be considered in diabetic patients.