Assessing human growth hormone variants to determine their potential relevance in anti-doping and clinical analysis

Author

Such Sanmartin, Gerard

Director

Gutiérrez Gallego, Ricardo

Segura Noguera, Jordi

Date of defense

2010-01-28

ISBN

9788469327265

Legal Deposit

B.19112-2010



Department/Institute

Universitat Pompeu Fabra. Departament de Ciències Experimentals i de la Salut

Doctorate programs

Programa de doctorat en Biomedicina

Abstract

Human growth hormone (GH) participates in human longitudinal growth, lipid and carbohydrate metabolism, and comprises a remarkably number of proteins with similar sequences, generated either genetically or post-translationally, that in some cases show clearly differentiated biological activities. Current methods employed for its quantification are mainly based on a specific immunodetection of the most concentrated GH variants in blood circulation. However, it is not clear neither which variants are recognised in each case, nor which is the real concentration of some of these variants. Probably related, present immunoassays show a disparity of results between them that difficults the comparison of data from different assays, with direct consequences in the clinical field. Within a doping context, the illegal administration of recombinant GH constitutes a complex challenge, given the fact that the pharmaceutical variant and the native 22 kDa GH variant do not show any structural difference that allows a direct detection. However, the administration of the pharmaceutical inhibits the natural production of the hormone, resulting in modifications between the relative concentration of some of these variants. In this case, which variants are detected is of utmost importance, since these constitute the base of this anti-GH doping method. Here, the relevance of some GH variants is addressed, including their generation, characterisation, analysis through specific antibodies and their detection on biological samples.


L'hormona de creixement humana (GH) participa en el creixement post-longitudinal i en el metabolisme de lípids i carbohidrats, i comprèn un extraordinari nombre de proteïnes de seqüències similars, generades tant genèticament com posttranslacional, que en alguns casos mostren activitats biològiques clarament diferenciades. Els mètodes actuals emprats per la seva quantificació es basen principalment en una immunodetecció específica de les variants de GH més concentrades en circulació sanguínia. Tanmateix, no resta clar quines variants es reconeixen en cada cas, ni quina és la concentració real d'algunes d'aquestes variants. Possiblement relacionat, els immunoassaigs actualment utilitzats mostren una disparitat de resultats que dificulten la comparació de dades d'assaigs diferents, amb conseqüències directes en el camp clínic. Dins d'un context de dopatge, l'administració il·legal de GH recombinant constitueix un desafiament complex, donat el fet que la variant farmacèutica i la variant de GH nativa de 22 kDa no mostren cap diferència que permeti una detecció directa. No obstant, l'administració del medicament farmacèutic inhibeix la producció natural de la hormona, derivant en canvis entre la concentració relativa d'algunes d'aquestes variants. En aquest cas, és de màxima importància quines variants són detectades, ja que això constitueix la base d'aquest mètode d'antidopatge de GH. Aquí, s'estudia la rellevància d'algunes variants de GH, incloent-hi la seva generació, caracterització, anàlisi via anticossos específics i la seva detecció en mostres biològiques.

Keywords

amplificació de senyal; superficial; ressonància de plasmó; caracterització d'anticossos; anticossos; anticossos anti-GH; dicroisme circular; síntesi en fase sòlida; thermolisinòlisis; thermolisina; purificació; generació; fragmentació de pèptids; fragmentació de proteïnes; proteòlisis limitada; GH44-191; GH1-191; 22 kDa; GH1-43; 20 kDa; 17 kDa; 5 kDa; humana; fragments de la hormona de creixement humana; isoformes de la hormona de creixement; variants de la hormona de creixement humana; Hormona de creixement humana; protocol; C-reactive protein; mannanbinding lectin; serum purification; blood purification; MALDI; mass spectrometry; western blot; immunoassay; SPR-based method; signal enhancement; surface plasmon resonance; anti-GH antibodies; characterisation of antibodies; antibodies; circular dichroism; solid phase synthesis; thermolysinolysis; thermolysin; generation; purification; fragmentation; peptide; protein fragmentation; mètode basat en SPR; limited proteolysis; GH1-191; GH44-191; GH1-43; 22 kDa; 20 kDa; 17 kDa; 5 kDa; human growth hormone fragments; human growth hormone isoforms; human growth hormone variants; Human growth hormone; immunoassaig; western blot; MALDI; espectrometria de massa; purificació de sang; purificació de sèrum; proteïna C-reactiva; mannan binding lectin; protocol

Subjects

615 - Pharmacology. Therapeutics. Toxicology

Documents

tgs.pdf

13.08Mb

 

Rights

ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.

This item appears in the following Collection(s)